[发明专利]一种PCR仪校准用标准样品、构建方法以及应用方法

说明书

本发明公开了一种PCR仪校准用标准样品，所述一种PCR仪校准用标准样品由核苷酸(不仅限于)片段组成，加入常见酶切位点，插入到常规的克隆载体中制备而得。本发明的标准样品及其方法对PCR仪的定期校准可用于监测PCR仪计量特性的变化，极大的避免PCR过程中假阳性或假阴性结果的产生，提高PCR试验的准确性和稳定性，本发明中标准样品易于制备、成本低、性能稳定，易于保存、通用性好并且准确性高，本发明中标准样品及其方法可有效避免交叉污染，提高校准检测的准确性、操作简便、用时短并且组成成分安全无毒。

技术领域

本发明涉及一种PCR仪，具体为一种PCR仪校准用标准样品、构建方法 以及应用方法。

背景技术

聚合酶链式反应分析仪(Polymerase Chain Reaction Analyzer,以下简 称PCR仪)，是一种利用DNA聚合酶及其反应所需的材料在一定的温度条件下 使基因DNA序列发生复制扩增的仪器，主要包括普通定性PCR仪和荧光定量 PCR仪两种类型。定性PCR通常由热循环部件、控制部件和电源部件等部分组 成。荧光定量PCR仪主要由样品承载台、热循环部件、传动部件、荧光检测 光学部件、微电路控制部件、计算机及应用软件组成。

聚合酶链反应(PCR)技术由于其极高的检测灵敏度和特异性已越来越多 地被应用于转基因检测、临床检验、食品检测、司法鉴定、科研等工作中。 有多种原因会造成PCR扩增的错误结果，排除实验过程中人为因素造成的误 差，PCR仪的优劣是造成检测检验结果出现偏差甚至错误的至关重要因素。避 免PCR过程中假阳性或假阴性结果的产生，提高PCR实验的准确性、重复性 和稳定性至关重要。

另外，几乎进行聚合酶链反应试验的实验室(如转基因检测、临床检验、 食品检测、基因判别、亲子鉴定、DNA个体识别、科研等)都会使用多台PCR 仪以满足实验需求。而且，实验室内的PCR仪都是常开常用，使用频率高， 很难保证其性能指标符合实验要求。各实验室对PCR仪的质量控制还停留在 自检自校和依赖于厂商的售后支持。

PCR仪经使用后，其计量特性会发生变化，作为计量设备一般须经定期校 准后方能继续使用。

而作为PCR仪校准用标准样品及其方法是目前紧缺的，而现有技术中无PCR仪校准用标准样品；无统一的PCR仪校准的体系和方法；并且常规使用的 PCR检测判断存在气溶胶污染现象，为此，我们提出一种PCR仪校准用标准样 品、构建方法以及应用方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种PCR仪校准用标准样品、构建方法以及应用 方法，以解决背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种PCR仪校准用标准样 品，所述一种PCR仪校准用标准样品由图2所示的核苷酸(不仅限于)片段 组成，加入常见酶切位点，插入到常规的克隆载体中制备而得，所述一种PCR 仪校准用标准样品由特异的动植物及微生物基因序列组成。

一种PCR仪校准用标准样品的构建方法，一种PCR仪校准用标准样品的 构建方法包括以下步骤：

(1)选取特异的动植物及微生物基因序列进行拼接，获得独一特异的基 因序列；

(2)合成核苷酸片段；

(3)设计PCR特异性引物；

(4)PCR扩增；

(5)目标序列获取，并通过测序进行验证；

(6)将目标片段插入克隆载体中；

(7)通过PCR、酶切、测序等验证标准样品的准确性；

(8)对标准样品进行特异性、稳定性、均匀性进行检测；