[发明专利]一种DNA传感器及其制备方法、一种检测短链DNA的方法

说明书

本发明提供了一种DNA传感器及其制备方法、一种检测短链DNA的方法，将制备的聚吡咯/银@氯化银复合材料电极置于发夹DNA HP1的溶液，孵化后，再放入不同浓度的短链DNA中进行孵化，再浸泡在含有Zn²⁺的8‑17DNAzyme溶液中，即制备成DNA传感器。将没食子酸作为电活性物质，通过检测光电流的响应大小，来定量检测短链DNA的浓度。与现有技术相比，本发明提供的PEC DNA检测方法不仅检测限低，检测范围广，而且对目标DNA有很好的选择性.此外，可以广泛应用于检测各种DNA序列，特别是那些短的特定DNA序列，为开展痕量DNA序列检测开辟了新的途径，也为各种疾病的早期诊断提供了有效的检测手段。

技术领域

本发明属于生物传感器技术领域，具体设计一种DNA传感器及其制备方法、一种检测短链DNA的方法，利用聚吡咯/银@氯化银纳米线复合电极作为电极材料光电检测慢性髓细胞白血病的短链DNA物种。

背景技术

慢性骨髓性白血病(CML)是一种克隆性骨髓增殖性疾病。慢性粒细胞白血病患者在初期并未出现任何明显的症状，慢性病程可持续3-5年，这些现象给CML的诊断带来了困难。BCR/ABL基因是该疾病的传统基因，并且几乎存在于所有CML患者的病例中。

BCR/ABL基因有许多种类型，而b3a2型是最常见的突变类型之一。因此，检测b3a2型基因会有助于对疾病进行早期诊断和监测，进一步提高检测微小残留白血病细胞的能力。

近年来，CML融合基因的临床诊断和预后监测方法包括染色体分析，Southern杂交，聚合酶链式反应(PCR)，荧光原位杂交(FISH)等。但上述这些方法都有一定的局限性。染色体分析是耗时且不敏感的；传统的Southern杂交检测具有特异性，但对基因序列低复制性的检测非常不敏感，检测方法复杂，周期过长，而且依赖于危险的放射性标记，限制了它的广泛性应用于临床。PCR是一种基于酶的DNA扩增技术，通常用于这些应用。虽然PCR非常敏感，但从实际的角度来看，它仍有待改进。它的缺点包括相对较长的测定时间，高的测定成本以及偶尔会导致“假阳性”信号的容易出错的性质。FISH技术需要复杂的荧光着色系统，其灵敏度仍不高，不能在临床上广泛应用。因此，开展和调查CML基因检测技术是非常重要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种DNA传感器及其制备方法。

本发明还提供了一种检测短链DNA的方法，利用制备的聚吡咯/银@氯化银纳米线复合电极作为传感器，光电检测慢性髓细胞白血病的短链DNA物种的方法。

本发明具体技术方案如下：

本发明提供的一种DNA传感器的制备方法为：

1)将聚吡咯/银@氯化银纳米线复合电极置于发夹DNA HP1的溶液中，孵化，然后取出电极洗涤，干燥；

2)将步骤1)处理后的电极置于不同浓度的目标短链DNA溶液中进行孵化，然后取出电极洗涤，干燥；

3)步骤2)处理后的电极置于含Zn²⁺和8-17DNAzyme的溶液中，孵化；然后取出电极洗涤，干燥；即得DNA传感器。

步骤1)中将聚吡咯/银@氯化银纳米线复合电极置于50μL 4μM的发夹DNA HP1的溶液中，DNA HP1溶液的配制方法为：将买回来的DNA HP1加pH 7.4的0.1M的PBS缓冲溶液配成100μM的HP1溶液，然后再用同样的PBS溶液稀释到4μM的浓度；备用；

步骤1)中所述聚吡咯/银@氯化银纳米线复合电极采用201410299007.8公开的方法制备得到。

步骤1)中所述发夹DNA HP1序列为：

5′-GTGAAGGGCGACCACAGAGTTCAAAAGCCCTTCACTAT/RA/GGAAGAGA-SH-3′；