[发明专利]一种采用双硫盐修饰策略构建的胞内可逆的稳定多肽

说明书

本发明提供了一种采用双硫盐修饰策略构建的胞内可逆的稳定多肽，通过烷基化多肽序列上的两个天然的甲硫氨酸残基构建而成，其结构式如下所示，X,Y,Z代表任意氨基酸，LA₁/LA₂代表连接氨基酸。本发明采用在酸性条件下，通过烷基化试剂，化学选择性的烷基化含有两个甲硫氨酸残基的天然的线性多肽而构建的稳定多肽。同时，在还原性条件下，该双硫盐稳定多肽可以可逆的发生去烷基化，生成原来的天然的线性多肽。并在细胞环境中，通过氨基香豆素实验证实了，在生理条件下该稳定方法的可还原性。最后，该稳定多肽的细胞膜穿透性和胰酶稳定性较其线性天然多肽有显著性的提高。

技术领域

本发明属于生物化学领域，涉及一种多肽，具体来说是一种采用双硫盐修饰策略构建的胞内可逆的稳定多肽。

背景技术

蛋白-蛋白相互作用在众多生理活动中起着重要作用，且维持着整个生命过程的稳态。许多疾病的发生发展都与蛋白-蛋白相互作用的稳态失衡有关。因此靶向蛋白-蛋白相互作用被认为是一种非常有前景的治疗性策略。多肽相对于小分子药物来说，具有更小的脱靶效应，同时保留了生物大分子药物对于靶点较高的亲和力和选择性，可以固相合成，容易修饰，可以有效拓展靶向分子的化学空间。但是由于多肽容易在体内降解，穿膜能力差，口服生物利用度低，极大地限制了其生物学应用。

21世纪以来，不断发展和完善的稳定多肽技术在锁定多肽活性构象的同时，很好的解决了其线性多肽的以上问题。具体来说，通过首尾相连或者侧链-侧链，侧链-尾端相连的策略在多肽主链上引入一个化学修饰的侧链，如全碳氢侧链稳定体系，硫醚侧链稳定体系，酰胺键侧链稳定体系等。以上稳定多肽技术在许多细胞内靶点如P53,Ras,ERα等已经得到了广泛应用并有个别分子已经在临床研究当中。

大多数情况下，稳定多肽的侧链是设计在与靶点相互面的对面，从而避免与靶点的不必要的相互作用。然而，以上稳定多肽技术，都不可避免的在多肽分子本身额外的引入了一个有可能与靶点有潜在有利/不利相互作用的侧链。

发明内容

针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种采用双硫盐修饰策略构建的胞内可逆的稳定多肽，所述的这种采用双硫盐修饰策略构建的胞内可逆的稳定多肽要解决现有技术在多肽分子中引入了一个有可能与靶点有潜在有利/不利相互作用的侧链，线性多肽容易在体内降解，穿膜能力差，口服生物利用度低，极大地限制了其生物学应用的技术问题。

本发明提供了一种采用双硫盐修饰策略构建的胞内可逆的稳定多肽，通过烷基化多肽序列上的两个天然的甲硫氨酸残基构建而成，其结构式如下所示，

X,Y,Z代表任意氨基酸，LA₁/LA₂代表连接氨基酸；m,n,a,b,c代表自然数，其中m+n≤10，a+b+c≤50。

进一步的，所述的多肽的序列为：Ac-WMRGDM-NH₂，Ac-WMKIEMA-NH₂，Ac-WMHVDMA-NH₂，Ac-WMPYGMA-NH₂，Ac-WMCLMA-NH₂，Ac-WMKEMA-NH₂，Ac-WMPHMA-NH₂，Ac-WMRGDRGDM-NH₂，Ac-WβAMPQLPPMG-NH₂，Ac-WβAMHSRMPQLPPMG-NH₂，FITC-βAMRRRM-NH₂，FAM-βARMILMRLLQ-CONH₂，FAM-βAMCNVVPLY(po3)DLLLEM-CONH₂或者Ac-Met-Asp-Nle-Met-Asp-amc中的任意一种。