[发明专利]一种快速检测核酸突变的试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 201711485219.5 | 申请日： | 2017-12-29 |
| 公开（公告）号： | CN108179177A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 张睿;李博安;詹尔昌;郭永斌 | 申请（专利权）人： | 博迪泰（厦门）生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858 |
| 代理公司： | 广州三环专利商标代理有限公司 44202 | 代理人： | 郭锦辉 |
| 地址： | 361000 福建省*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核酸 反向引物 固相介质 快速检测 试剂盒 检测 突变 分子生物学领域 高通量筛选 突变型基因 硝酸纤维膜 野生型基因 呈色反应 单点突变 多个基因 基因突变 加热循环 检测结果 突变检测 聚合酶 微阵列 重组酶 扩增 判读 筛查 微盘 简易 | ||
1.一种快速检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括针对突变型基因和野生型基因的引物组、重组酶、聚合酶、DNA结合蛋白和固相介质，所述引物组包括正向引物和反向引物，针对突变型基因和野生型基因的反向引物固定在固相介质上，形成微阵列芯片。
2.根据权利要求1所述的快速检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，所述正向引物修饰有生物素，反向引物修饰有特异标记物或60～80个胸腺嘧啶核苷酸。
3.根据权利要求2所述的快速检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，所述特异标记物为地高辛或FAM荧光。
4.根据权利要求1所述的快速检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，所述重组酶为T4uvsX/uvsY，所述聚合酶为Bsu DNA聚合酶，所述DNA结合蛋白为T4 gp32。
5.根据权利要求1所述的快速检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括ddH2O、缓冲溶液和呈色剂。
6.根据权利要求5所述的快速检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，所述缓冲溶液含有下述浓度的组分:Tris-HCl缓冲液50mM、乙酸钾100mM、乙酸镁14mM、二硫苏糖醇2mM、dNTPs200μM、ATP 3mM、磷酸肌酸50mM、肌酸激酶100ng/μL和Carbowax20M 5wt％；所述Tris-HCl缓冲液的pH值为7.9。
7.根据权利要求5所述的快速检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，所述呈色剂包括显色乳胶或酶催化呈色剂。
8.根据权利要求1所述的快速检测核酸突变的试剂盒，其特征在于，所述固相介质为硝酸纤维膜或96孔平底微盘。
9.根据权利要求1～8任一项所述的快速检测核酸突变的试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)针对突变型基因和其相对应的野生型基因分别设计专一性引物；
(2)提取样本核酸DNA；
(3)将反向引物固化在固相介质上，形成微阵列芯片；
(4)配置反应体系；
(5)震荡混匀步骤(4)制得的反应体系后，转移至(3)所述的具有固化反向引物的固相介质上，于37～42℃恒温反应10～20分钟，进行RPA扩增；
(6)结果呈色与判读：通过观察呈色反应结果，对步骤(5)所得的RPA扩增产物进行基因型鉴定。
10.根据权利要求9所述的快速检测核酸突变的试剂盒的检测方法，其特征在于，所述步骤(3)中，将修饰有特异标记物或60～80个胸腺嘧啶核苷酸的反向引物溶于固化液中，通过自动点片机置于固相介质上。
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