[发明专利]用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒、检测方法及应用

说明书

本发明涉及微生物耐药性技术领域，具体公开一种用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒、检测方法及应用。本发明设计了acr耐药通路的4个基因的引物，并且以16S rDNA为内参基因。使用Fast Start Universal SYBR Green Master(Roche Diagnostics GmbH,Germany)抗性基因检测试剂盒检测基因的表达量，使用高通量荧光定量PCR仪进行扩增，两株细菌的氟喹诺酮相关基因的相对表达量和细菌之间的差异表达倍数可以直观地反应出来，更加科学和严谨，填补技术空白。

技术领域

本发明涉及微生物耐药性技术领域，尤其涉及一种用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒、检测方法及应用。

背景技术

acr耐药外排系统与大肠杆菌抵抗药物杀伤的主要外排泵，多药耐药外排泵：就是对大肠杆菌体内的药物有外排功能，并且不是针对性的，是大肠杆菌保护自己不被药物杀死的一个外排系统，比如使用抗生素，大肠杆菌会被杀死，而大肠杆菌被杀死的原因是因为抗生素在大肠杆菌体内产生了毒害作用，而大肠杆菌的这个耐药外排泵可以把这些对自己有毒害作用的药物排出去，从而变得耐药，人如果感染了这种细菌，用抗生素的效果就不太好。目前尚无检测大肠杆菌耐药外排系统的方法，在实际用药中，由于该系统活跃程度的不同，治疗效果受到很大影响，不能更好的指导用药。

发明内容

针对现有尚无检测大肠杆菌耐药外排系统的方法等问题，本发明提供一种用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒。

进一步地，本发明还提供一种用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测方法。

进一步地，本发明还提供所述的用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒或所述的用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测方法在大肠杆菌药物流出系统acr领域中的应用。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：

一种用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒，所述检测试剂盒用于高通量荧光定量PCR检测大肠杆菌药物流出系统acr，所述检测试剂盒包括16S rDNA为内参基因的acrF、acrR、acrE、acrS基因的引物，所述引物的序列如下：

16S的上游引物：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；

16S的下游引物：GGTTACCTTGTTACGACTT；

acrF的上游引物：GCGGCCAGGCACAAAA；

acrF的下游引物：TACGCTCTTCCCACGGTTTC；

acrR的上游引物：GCGCTGGAGACACGACAAC；

acrR的下游引物：GCCTTGCTGCGAGAACAAA；

acrE的上游引物：AAATACATCAGCCAGCAGGAG；

acrE的下游引物：GTTCAGTCGTTTGCCCATTAG；

acrS的上游引物：AAAAGAACCAAAGCCGAAGC；

acrS的下游引物：CGAAGTGCCAGTAGATAGCG。

进一步地，本发明提供一种用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测方法，所述检测方法为高通量荧光定量PCR方法，所述检测方法至少包括以下步骤：

步骤1、从待测样品中提取DNA样品；

步骤2、采取上述大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒对步骤1所提取的所述DNA样品使用高通量荧光定量PCR仪进行扩增反应；

步骤3、对所得结果进行数据分析。