[发明专利]用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒、检测方法及应用在审
| 申请号： | 201711377828.9 | 申请日： | 2017-12-19 |
| 公开（公告）号： | CN108165643A | 公开（公告）日： | 2018-06-15 |
| 发明（设计）人： | 张石磊;王春光;张铁;吕建存;贾泽 | 申请（专利权）人： | 河北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6851;C12Q1/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 石家庄国为知识产权事务所 13120 | 代理人： | 林艳艳 |
| 地址： | 071000 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 大肠杆菌 检测试剂 流出系统 细菌 荧光定量PCR仪 抗性基因检测 微生物耐药性 试剂盒检测 相对表达量 差异表达 氟喹诺酮 技术空白 内参基因 相关基因 基因 表达量 高通量 检测 扩增 引物 应用 直观 填补 | ||
1.一种用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒，其特征在于：所述检测试剂盒用于高通量荧光定量PCR检测大肠杆菌药物流出系统acr，所述检测试剂盒包括16S rDNA为内参基因的acrF、acrR、acrE、acrS基因的引物，所述引物的序列如下：
16S的上游引物：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG；
16S的下游引物：GGTTACCTTGTTACGACTT；
acrF的上游引物：GCGGCCAGGCACAAAA；
acrF的下游引物：TACGCTCTTCCCACGGTTTC；
acrR的上游引物：GCGCTGGAGACACGACAAC；
acrR的下游引物：GCCTTGCTGCGAGAACAAA；
acrE的上游引物：AAATACATCAGCCAGCAGGAG；
acrE的下游引物：GTTCAGTCGTTTGCCCATTAG；
acrS的上游引物：AAAAGAACCAAAGCCGAAGC；
acrS的下游引物：CGAAGTGCCAGTAGATAGCG。
2.一种用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测方法，其特征在于：所述检测方法为高通量荧光定量PCR方法，所述检测方法至少包括以下步骤：
步骤1、从待测样品中提取DNA样品；
步骤2、采取权利要求1所述大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒对步骤1所提取的所述DNA样品使用高通量荧光定量PCR仪进行扩增反应；
步骤3、对所得结果进行数据分析。
3.如权利要求2所述的用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测方法，其特征在于：所述高通量荧光定量PCR反应体系组成如下：Roche FastStart Universal SYBR GreenMaster：5μL，ddH2O：3μL，上游引物：0.75μL，下游引物：0.75μL，DNA样品：0.5μL。
4.如权利要求3所述的用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测方法，其特征在于：所述DNA样品的浓度为5ng/uL，所述上游引物和下游引物的浓度均为0.1μM。
5.如权利要求2所述的用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测方法，其特征在于：所述步骤2中扩增反应的条件为：首先在95℃条件下反应10min，进行1次循环；其次在95℃条件下反应30s，进行40次循环，最后在60℃条件下反应30s，进行40次循环。
6.如权利要求2所述的用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测方法，其特征在于：所述步骤3中采取数据的平均值、标准偏差、倍数变化值、热图进行分析。
7.如权利要求1所述的用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测试剂盒或权利要求2-6任一项所述的用于大肠杆菌药物流出系统acr的检测方法在大肠杆菌药物流出系统acr领域中的应用。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于河北农业大学，未经河北农业大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201711377828.9/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
