[发明专利]利用超临界模拟移动床色谱系统分离纯化碱蓬中槲皮素

说明书

【技术领域】

本发明属于碱蓬中槲皮素分离纯化领域，特别涉及一种利用新兴的超临界模拟移动床色谱系统分离并制备碱蓬中槲皮素的方法。

【背景技术】

槲皮素(Quercetin)，化学名为3，5，7，3′，4′-五羟基黄酮，又名栎精、槲皮黄素，是植物界分布最广泛的黄酮类化合物，大约分布在68％的植物中，常存在植物的花、叶、果实之中。作为黄酮类化合物中具有代表性的一种，具有祛痰、止咳、平喘作用。此外还有降低血压、降血脂、抗肿瘤、舒张血管、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉，增加冠脉血流量等作用，可用于用于治疗慢性支气管炎，对冠心病及高血压患者也有辅助治疗作用，具有极高的药用价值。

碱蓬为藜科一年生草本植物，生于海涂或盐场的盐滩之上，在我国具有相当丰富的资源。碱蓬中槲皮素含量丰富，以花期含量最高，可达427mg/100g。目前对于槲皮素的分离纯化方法有：柱色谱法、高效液相色谱法和超临界流体色谱法等，这些色谱法分离效率高，选择性好，但定性能力较差。超临界模拟移动床色谱法是一种模拟真实移动床的重要分离工艺，在模拟移动床色谱中，固相逆流移动由进样和溶剂入口与残液和提取物出口周期性切换来模拟，相当于柱子朝与切换方向相反的方向移动。该色谱法减少了固定相与流动相的体积、填料更加有效，成本的节约使其经济可行，因此成本更低，利于商业推广使用；采用超临界提取可以改善普通色谱法定性能力较差的缺点；模拟逆流的实现避免了因固相的物理移动导致的缺点；打破了现存制备色谱不连续且溶质稀释的缺点，工艺具连续性，可以将二元样品分离为高度纯净的两个组分，并完全回收，可高效拆分分离因子相对较小的化合物；可以分离手性化合物，在功能性成分分离，尤其是医药方面具有相当广阔的前景。因此本发明开发一种可连续分离纯化碱蓬中槲皮素的新方法——超临界模拟移动床色谱系统(SF-SMB)，以期实现槲皮素的产业自动化操作和稳定的产品质量控制。

目前，对于槲皮素的纯化多采用柱色谱法、高效液相色谱法和超临界流体色谱法。柱色谱法主要利用固定相对不同组分的吸附能力不同而分离纯化的原理，这种纯化方法的纯化效果不理想，存在着纯度低，效率差等缺点。高效液相色谱法消耗大量溶剂产品过于稀释以及往往无法避免有毒溶剂的使用；超临界流体色谱法技术设备相当昂贵，且该技术在实验室中的应用远远大过它在工业化生产中的应用。

【发明内容】

本发明要解决的技术问题是提供一种可连续操作的，纯化效果好，收率高，具有自动化操作的利用超临界模拟移动床色谱系统(SF-SMB)技术分离并纯化碱蓬中槲皮素的方法。

发明的技术方案是：

一种利用超临界模拟移动床色谱系统(SF-SMB)技术分离并纯化碱蓬中槲皮素的方法，其具体步骤是：

1.1碱蓬的筛选

挑选大小适中，颜色新鲜、无虫害的碱蓬；

1.2碱蓬的预处理

(1)清洗处理

将碱蓬放在清水中浸泡，冲洗，直至碱蓬上没有泥垢；

(2)干燥处理

将碱蓬平铺并放在通气良好的环境中干燥处理，50℃～60℃下烘箱中干燥处理2h～4h；使得碱蓬表面的水分干燥；

(3)杀青

在微波下进行杀青，摊放碱蓬叶厚度2～5厘米，2kw的微波处理10-15分钟；

(4)粉碎

将经干燥处理的碱蓬在室温下于粉碎机中粉碎，过60～100目筛；

1.3槲皮素的提取

采用超声波辅助水酶法对碱蓬槲皮素进行提取，采用复合酶：纤维素酶∶果胶酶＝1∶1进行处理，酶解时间30min～60min、酶解温度40℃～60℃、酶解pH4.0～6.0、加酶量1000U/g～5000U/g，料液比1∶10～1∶30，辅助超声功率200W～600W；

1.4纯化预处理

将提取物进行离心3min～10min，3000rpm～5000rpm，取上清液于0.45μm滤膜抽滤，上清液经旋转蒸发至干，50％乙醇溶解；

1.5槲皮素的纯化