[发明专利]一种引物组合物及其应用

权利要求书

1.一种引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括P1、P2和P3，所述P1包括粘性末端1、正向引物和茎环序列，所述P2包括粘性末端2、反向引物和所述P1的茎环序列的反向互补序列，P3为正向引物的反向互补序列，其中，所述正向引物为目的基因的siRNA对应的靶位点序列，所述正向引物和所述反向引物互为互补链。

2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述正向引物的目的基因为DNMT1。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述DNMT1的siRNA对应的靶位点核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

优选地，所述P1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；

优选地，所述P2的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；

优选地，所述P3的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

4.一种shRNA，其特征在于，所述shRNA由如权利要求1-3中任一项所述的引物组合物制备得到；

优选地，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

5.一种如权利要求4所述shRNA的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)用TE缓冲液溶解P1、P2和P3；

(2)加超纯水稀释至终浓度为0.1-1μM；

(3)置于沸水浴中反应1min，自然冷却至室温，获得shRNA；

优选地，步骤(2)所述终浓度为0.1μM。

6.一种慢病毒载体，其特征在于，所述慢病毒载体包含如权利要求4所述的shRNA。

7.一种如权利要求6所述慢病毒载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

将合成的shRNA序列连接到慢病毒载体上，转化至感受态细胞内，培养过夜；

优选地，所述慢病毒载体为pLVX-U6-ccdb-EF1-copGFP-PGK-puro；

优选地，所述感受态细胞为STBL3。

8.一种药物组合物，其特征在于，包含如权利要求4所述的shRNA和/或如权利要求6所述的慢病毒载体。

9.一种如权利要求8所述的药物组合物用于制备抑制DNMT1基因的表达的生物抑制剂。

10.一种如权利要求8所述的药物组合物用于制备治疗癌症的药物；

优选地，所述癌症包括肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌或卵巢癌中的任一种或至少两种的组合。