[发明专利]一种铅的耐高盐核酸传感器及其应用

权利要求书

1.一种铅的耐高盐核酸传感器，包括分子识别元件、信号放大元件和信号转换元件，其特征在于，

所述分子识别元件包括铅离子脱氧核酶；所述铅离子脱氧核酶由底物链与酶链组成；

所述信号放大元件包括等温扩增体系，所述等温扩增体系包括扩增模板；

所述信号转换元件包括氯高铁血红素和显色剂；

所述脱氧核酶底物链的序列(5’-3’)为：CTCACTATrAGGAAGAGATGATGTCTGTTTGGGGGGTT；

所述脱氧核酶酶链的序列(3’-5’)为：ACAGACATCATCTCTGAAGTAGCGCCGCCGTATAGTGAGCCC；

所述扩增模板的序列(5’-3’)为：ACCCGCCCGCCCACCCTCCCGCCCGCCCTCCCAACTGACTCTTAACCCCCCAAACAGACATCATCTCTTCC；

所述等温扩增体系包括A体系和B体系；

所述A体系包括：扩增模板、dNTPs、脱氧核酶切割产物；

B体系包括：Bst DNA聚合酶、Bst DNA聚合酶缓冲溶液、Nt.BstNBI切刻内切酶和Nt.BstNBI切刻内切酶缓冲溶液；

所述信号转换元件还包括终止剂。

2.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于，所述终止剂为硫酸；所述显色剂为TMB显色剂。

3.权利要求1或2所述传感器在非疾病诊断目的检测铅离子中的应用。

4.一种非疾病诊断目的检测铅离子的方法，其特征在于，包括步骤如下：

制备铅离子浓度和G-四链体功能核酸显色光密度关系的标准曲线；

按上述制备标准曲线的过程进行待测样品的检测，得到待测样品的G-四链体功能核酸显色光密度值，通过上述标准曲线计算铅离子的浓度；

其中铅离子浓度和G-四链体功能核酸显色光密度关系的标准曲线的步骤包括：

(1)制备铅离子脱氧核酶切割产物：将铅离子脱氧核酶底物链与酶链混合、加热、降温得到铅离子脱氧核酶，然后加入不同浓度的铅离子溶液反应，终止反应后，得到不同浓度的铅离子脱氧核酶切割产物溶液；

(2)目标产物的等温扩增：

等温扩增体系由A体系、B体系组成；

所述A体系包括扩增模板、dNTPs、铅离子脱氧核酶切割产物；

所述B体系包括Bst DNA聚合酶、聚合酶反应缓冲溶液、Nt.BstNBI切刻内切酶和Nt.BstNBI切刻内切酶反应缓冲溶液；

所述脱氧核酶底物链的序列(5’-3’)为：CTCACTATrAGGAAGAGATGATGTCTGTTTGGGGGGTT；

所述脱氧核酶酶链的序列(3’-5’)为：ACAGACATCATCTCTGAAGTAGCGCCGCCGTATAGTGAGCCC；

所述扩增模板的序列(5’-3’)为：ACCCGCCCGCCCACCCTCCCGCCCGCCCTCCCAACTGACTCTTAACCCCCCAAACAGACATCATCTCTTCC；

其中扩增模板中GACTC为Nt.BstNBI切刻内切酶识别序列；

将所述不同浓度的铅离子脱氧核酶切割产物溶液与其他A体系的组成物质混合，然后分别与B体系混合，制备不同的浓度的铅离子脱氧核酶切割产物扩增体系，进行等温扩增反应，得到一系列浓度的扩增产物；

(2)G-四链体结构显色物制备

将氯高铁血红素与上述一系列扩增产物分别进行反应，然后加入显色剂后进行OD值检测，得到OD值随铅离子浓度变化的标准曲线。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述铅离子脱氧核酶的制备方法包括：将铅离子脱氧核酶底物链与铅离子脱氧核酶酶链用缓冲液稀释，95℃加热15min，然后缓慢降温至25℃。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述等温扩增反应的步骤为：加入铅离子溶液的A体系在进行等温扩增反应前95℃孵育5min后，A体系和B体系迅速进行混合，55℃孵育扩增20min；95℃保持10min，以终止反应。