[发明专利]一种接种液组合物及利用其构建恶性胸腔积液来源异种移植瘤动物模型的方法

说明书

本申请涉及一种接种液组合物及利用其构建恶性胸腔积液来源异种移植瘤动物模型的方法。本发明提供的接种液包含以下组分：Hank's平衡盐缓冲液，胎牛血清，基底膜基质胶，和ROCK蛋白抑制剂。本发明构建恶性胸腔积液来源异种移植瘤动物模型的方法包括采集临床恶性胸腔积液样本、富集肿瘤细胞、利用本发明的接种液悬浮细胞并接种至动物以形成异种移植瘤的步骤。本发明的建模方法简单易行、成瘤率高，因此可用于各种伴有恶性胸腔积液的癌症特别是肺癌的药物筛选及机制研究。

技术领域

本发明属于医药模型领域。更具体而言，本发明涉及恶性胸腔积液来源的异种移植瘤动物模型的构建。

背景技术

在我国，肺癌已代替肝癌成为首位恶性肿瘤死亡原因，而且发病率和死亡率仍在继续迅速上升。肺癌的高死亡率主要是因为60-70％的肺癌患者被发现时已是肺癌晚期，失去了手术机会无法根治。

肿瘤动物模型是进行肿瘤相关机制和药物筛选研究的重要平台。目前，临床前肿瘤动物模型多采用肿瘤细胞系进行皮下接种的方法，其具有易建立和易重复等优点。但肿瘤细胞系因在体外建立，脱离了自然的肿瘤微环境，使其遗传不稳定且不能概括患者肿瘤的异质性。因此该方法建立的肿瘤动物模型，不能完全反映癌症病人复杂的临床症状，具有很大局限性。为了克服这些问题，研究者们建立了癌症病人来源的异体移植肿瘤动物模型，即将来源于患者的手术肿瘤组织移植入免疫缺陷小鼠体内。该模型非常好得维持了肿瘤移植物的组织学特性、基因表达谱、SNP位点和拷贝数变异等多个特征，因此可应用于病人的个性化药物筛选、生物标志物鉴定、临床前肿瘤药物药效评价和生物学机制研究等，为药物临床试验结果的预测提供了更加准确的结果。

目前，肺癌患者来源肿瘤移植模型的建立方法主要是利用患者的手术组织移植入免疫缺陷小鼠皮下。虽然，在临床上很多肺癌患者经常合并发生的恶性胸腔积液，其他恶性肿瘤晚期也会伴发恶性胸腔积液，例如乳腺癌、淋巴瘤等恶性肿瘤(参见，林江涛等，胸膜活检联合胸水脱落细胞学检查在恶性胸腔积液诊断中的应用，《内科急危重症杂志》，2001，7(1))。然而，由于恶性胸腔积液中肿瘤细胞不仅数量较少，而且肿瘤细胞中含有已死亡或接近死亡的肿瘤细胞，除此之外胸水还含有免疫细胞及其他细胞，免疫细胞产生的炎症因子及其本身可能会杀伤肿瘤细胞。由于上述限制，一般认为，无法用恶性胸水来构建异种移植瘤动物模型。目前针对肺癌动物模型的研究方向主要是侧重于如何将手术采集到的肿瘤组织原位移植到动物中来构建异种移植瘤动物模型(王力伟等，移植性肺癌动物模型研究进展，《介入放射学杂志》，2015，24(7))。

综上所述，本领域迫切需要一种利用恶性胸腔积液构建异种移植瘤动物模型的方法。

发明内容

根据本发明第一方面，提供了一种恶性胸腔积液来源异种移植瘤动物模型，所述动物模型由以下方法构建：

(a)采集临床恶性胸腔积液样本；

(b)富集所述恶性胸腔积液样本中的肿瘤细胞；以及

(c)将如步骤(b)富集所得到的肿瘤细胞接种至实验动物，饲养动物至肿瘤形成，从而获得恶性胸腔积液来源的异种移植瘤动物模型。

一个优选实施方式中，所述步骤(b)中使用FX系统进行细胞富集。

一个优选实施方式中，将所述步骤(b)所获得的肿瘤细胞进行H&E染色，CK免疫荧光染色，以检测所富集的细胞是否为肿瘤细胞。

一个优选实施方式中，将所述步骤(b)所获得的肿瘤细胞用无菌接种液处理，所述无菌接种液包含：45体积份的HBSS，5体积份的胎牛血清和50体积份的Matrigel胶，加入Thiazovivin，终浓度为10uM。

另一个优选实施方式中，所述实验动物为重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠。