[发明专利]基于组合合成技术合成可控的人源化抗体库的方法与应用

权利要求书

1.一种基于组合合成技术合成可控的人源化抗体库的方法，其包括以下步骤：

第一步：设计人源化抗体库：在预构建的人源化抗体库中的合成序列中，在任意位置或者任意比例引入氨基酸；

第二步：组合合成随机引物库:在氨基酸变化区域，根据反向中心法则和DNA编码规则，设计对应的DNA序列，通过DNA固相亚磷酰胺三酯法合成随机的引物库；

第三步：构建人源化重组抗体库：在扩增体系中加入第二步中获得的引物库中的引物，进行扩增，扩增产物进行酶切后连入载体，获得人源化重组抗体库；

其特征在于，

第二步中所述的组合合成随机引物库，包括以下几步：

(1)按照DNA固相亚磷酰胺三酯法，合成3′端的一段序列，直至产生氨基酸变化位点；

(2)将(1)中合成的中间产物全部收集起来；

(3)根据设计的序列要求混合，按比例分组，从而达到变化数量的可控性；

(4)再继续合成相应的密码子碱基序列直至下一个氨基酸变化位点；

(5)根据氨基酸变化位点按照(2)-(4)中的收集、混合分组、合成方法完成所有氨基酸变化位点；

(6)收集(5)中合成的中间产物后无需分组，直接合成5’端一段非氨基酸序列；

根据设计的序列要求，按照所述(1)-(6)的方法完成待合成DNA序列和5′端全长序列的合成。

2.根据权利要求1所述的基于组合合成技术合成可控的人源化抗体库的方法，其特征在于，第一步所述的设计人源化抗体库，包括：

合成人抗体重链可变区CDR3的序列，构建CDR3库在任意位置或者任意比例引入氨基酸，引入氨基酸原则按照组合合成方式，将氨基酸平均分配或者根据需要的比例引入；

然后将所述氨基酸序列编码后开始合成；

再根据已经公布的氨基酸在哺乳动物、大肠杆菌和酵母菌表达系统中密码子的偏好性，选取密码子出现频率最高的作为编码位点。

3.根据权利要求2所述的基于组合合成技术合成可控的人源化抗体库的方法，其特征在于，在哺乳动物、大肠杆菌、酵母菌表达系统中氨基酸对应的密码子序列为：

氨基酸名称HumanEcoliYeastpheUUCUUCUUULeuCUGCUGUUGIleAUCAUCAUUValGUGGUUGUUSerAGCUCUUCUProCCCCCGCCAThrACCACUACUAlaGCCGCUGCUTyrUACUACUAUHisCACCAUCAUGlnCAGCAGCAAAsnAACAACAAULysAAGAAAAAAAspGACGACGAUGluGAGGAAGAAArgAGACGUAGAGlyGGCGGUGGU

CysUGCUGCUGU

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