本发明涉及一种单质粒系统的CRISPRi载体及其制备方法,dCas9载体的序列如SEQ ID NO.6所示,图谱如附图2所示,CRISPRi载体通过将含有sgRNA启动子和sgRNA scaffold的基因片段重组到经酶切的dCas9载体中获得。发明利用CRISPRi技术,将dCas9蛋白和sgRNA scaffold构建到一个质粒系统中,实现在一个质粒中同时表达sgRNA和dCas9蛋白。该系统仅需要一次构建、一次转化即可实现sgRNA和dCas9蛋白的表达,该法过程简单、高效、快捷,大大简化质粒构建流程,缩短实验周期,提高工作效率。
本发明公开了一种新型的兼具核酸外切和单链DNA交换活性的通过人工合成的重组酶,具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列或SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列,以及其所组成的组合物和试剂盒。本发明还公开了其在克隆外源基因至载体靶位点中的应用,采用该新型重组酶所进行的将外源基因克隆至载体靶位点的方法,准确率更高,更为简单方便,更为快速,稳定性更好,且多片段链接一步成功率更高。