[发明专利]一种纳米粒子组合物及其在抗肿瘤血管生成中的应用

权利要求书

1.一种纳米粒子组合物，其特征在于，所述纳米粒子组合物为聚合物载体和表达治疗 基因的质粒自组装而成的纳米粒子；所述聚合物载体为环糊精-聚乙烯亚胺-聚乙二醇-叶 酸四元组装式聚阳离子载体；所述表达治疗基因的质粒为包含编码肝细胞生长因子的三环 片段蛋白DNA序列和编码内皮抑素蛋白DNA序列的真核表达质粒。

2.根据权利要求1所述的一种纳米粒子组合物，其特征在于，所述环糊精-聚乙烯亚胺- 聚乙二醇-叶酸四元组装式聚阳离子载体的结构式选自式1或式2；所述式1的结构式具体 为：

PEI₆₀₀-CyD-PEG-FA；

所述式2的结构式具体为：

PEI₆₀₀-CyD-PEG-FA；

式1和式2中，n为环糊精-聚乙烯亚胺-叶酸-聚乙二醇的单元结构数目，取值范围5-10， m1为聚乙烯亚胺中的仲氨基单元结构数目，取值为4-8，m2为聚乙烯亚胺中的叔氨基单元结 构数目，取值为2-5，L为聚乙二醇中氧乙烷单元结构数目，取值范围42-105。

3.根据权利要求1所述的一种纳米粒子组合物，其特征在于，所述表达治疗基因的质粒 为phEF1-HTLV-Igk-HK1Endo-SV40，其制备方法为：首先通过从人正常肝细胞LO2提取表达 人HGFK1的DNA模板，然后再亚克隆到phEF1-HTLV-Igk-XXX-SV40质粒，制得phEF1-HTLV- Igk-HGFK1-SV40质粒；将包含(G4S)3连接Endostatin的DNA片段插入到phEF1-HTLV-Igk- HGFK1-SV40质粒中的HGFK1-5’末端，构建表达HGFK1和Endostatin融合基因的质粒phEF1- HTLV-Igk-HK1Endo-SV40。

4.根据权利要求3所述的一种纳米粒子组合物，其特征在于，所述phEF1-HTLV-Igk- XXX-SV40包括：1)杂交启动子：人延伸因子-1α启动子和人T细胞白血病病毒的5’非转录区 序列，见SEQIDNO1，其能在哺乳动物细胞内长期启动调控基因的表达；2)编码分泌表达 信号肽IgK链引导序列的DNA序列，见SEQIDNO2；3)编码表达治疗基因DNA序列：人肝细 胞生长因子的三环片段与内皮抑素融合蛋白DNA序列，见SEQIDNO3；4)猴肾病毒polyA序 列：见SEQIDNO4；

SEQIDNO1：GGATCTGCGATCGCTCCGGTGCCCGTCAGTGGGCAGAGCGCACATCGCCCACAGTCCCCGA GAAGTTGGGGGGAGGGGTCGGCAATTGAACCGGTGCCTAGAGAAGGTGGCGCGGGGTAAACTGGGAAAGTGATGTCG TGTACTGGCTCCGCCTTTTTCCCGAGGGTGGGGGAGAACCGTATATAAGTGCAGTAGTCGCCGTGAACGTTCTTTTT CGCAACGGGTTTGCCGCCAGAACACAGCTGAAGCTTCGAGGGGCTCGCATCTCTCCTTCACGCGCCCGCCGCCCTAC CTGAGGCCGCCATCCACGCCGGTTGAGTCGCGTTCTGCCGCCTCCCGCCTGTGGTGCCTCCTGAACTGCGTCCGCCG TCTAGGTAAGTTTAAAGCTCAGGTCGAGACCGGGCCTTTGTCCGGCGCTCCCTTGGAGCCTACCTAGACTCAGCCGG CTCTCCACGCTTTGCCTGACCCTGCTTGCTCAACTCTACGTCTTTGTTTCGTTTTCTGTTCTGCGCCGTTACAGATC ，SEQIDNO2：ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGTTCCACTGGTGAC， SEQIDNO3：ATGGAGACAGACACACTCCTGCTATGGGTACTGCTGCTCTGGGTTCCAGGTTCCACTGGTGACCA TGAACTGCATCATTGGTAAAGGACGCAGCTACAAGGGAACAGTATCTATCACTAAGAGTGGTATCAAATGTCAGCC CTGGAGTTCCATGATACCACACGAACACAGCTTTTTGCCTTCGAGCTATCGGGGTAAAGACCTACAGGAAAACTACT GTCGAAATCCTCGAGGGGAAGAAGGGGGACCCTGGTGTTTCACAAGCAATCCAGAGGTACGCTACGAAGTCTGTGAC ATTCCTCAGTGTTAAGAAGTTGAATGCATGACCTGCTAAGGTGGTGGTAGCGGTGGTGGTAGTGGTGGCGGTGGCTC TGCCCACAGCCACCGCGACTTCCAGCCGGTGCTCCACCTGGTTGCGCTCAACAGCCCCCTGTCAGGCGGCATGCGGG GCATCCGCGGGGCCGACTTCCAGTGCTTCCAGCAGGCGCGGGCCGTGGGGCTGGCGGGCACCTTCCGCGCCTTCCTG TCCTCGCGCCTGCAGGACCTGTACAGCATCGTGCGCCGTGCCGACCGCGCAGCCGTGCCCATCGTCAACCTCAAGGA CGAGCTGCTGTTTCCCAGCTGGGAGGCTCTGTTCTCAGGCTCTGAGGGTCCGCTGAAGCCCGGGGCACGCATCTTCT CCTTTGACGGCAAGGACGTCCTGAGGCACCCCACCTGGCCCCAGAAGAGCGTGTGGCATGGCTCGGACCCCAACGGG CGCAGGCTGACCGAGAGCTACTGTGAGACGTGGCGGACGGAGGCTCCCTCGGCCACGGGCCAGGCCTCCTCGCTGCT GGGGGGCAGGCTCCTGGGGCAGAGTGCCGCGAGCTGCCATCACGCCTACATCGTGCTCTGCATTGAGAACAGCTTCA TGACTGCCTCCAAG，SEQIDNO4：AGTTTGCCCTGAGAGACCCAGCAGGCAACTGTGTGCACTTTGTGGCAGAG GAGCAGGACTGAGGATAAGAATTCGCTAGCTCGACATGATAAGATACATTGATGAGTTTGGACAAACCACAACTAGA ATGCAGTGAAAAAAATGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCTTTATTTGTGAAATTTGTGATGCTATTGCT TTATTTGTAACCATTATAAGCTGCAATAAACAAGTTAACAACAACAATTGCATTCATTTTATGTTTCAGGTTCAGGG GGAGGTGTGGGAGGTTTTTTAAAGCAAGTAAAACCTCTACAAATGTGGTA。