[发明专利]分析物富集方法和组合物

权利要求书

1.富集方法，包括：

(a)提供

(i)包含一个或多个在油中的水性隔室的乳剂，所述隔室中的至少一些包含PCR试剂、固定在乳剂珠粒上的第一种PCR引物、溶液中的第二种生物素化PCR引物、以及核苷酸序列模板；和

(ii)富集珠粒，其中所述富集珠粒大于所述隔室中的乳剂珠粒；

(b)使所述乳剂暴露于条件，以便在所述隔室中的至少一些中的所述乳剂珠粒的至少一些上扩增至少一些所述模板以产生扩增模板，其中所述扩增模板的一条链终止于生物素；

(c)通过使所述乳剂珠粒与所述富集珠粒接触来富集包含所述扩增模板的乳剂珠粒，其中所述包含所述扩增模板的乳剂珠粒结合所述富集珠粒，以便形成乳剂珠粒-富集珠粒复合物的群体，且其中不含扩增模板的乳剂珠粒不结合所述富集珠粒；和

(d)在这样的条件下俘获至少一些所述复合物群体，使得大部分所述不含扩增模板的乳剂珠粒未被俘获。

2.权利要求1的方法，还包括，在步骤(d)后：

(e)使所述复合物群体经历这样的条件，以便使所述包含扩增模板的乳剂珠粒与所述富集珠粒分离，使得大部分所述包含扩增模板的乳剂珠粒与所述富集珠粒分离。

3.权利要求1的方法，其中每个隔室平均包含少于1个模板。

4.权利要求1的方法，还包括在步骤(b)之后和步骤(c)之前破碎所述乳剂。

5.权利要求1的方法，其中所述富集珠粒包含链霉抗生物素蛋白。

6.权利要求4的方法，还包括在所述破碎步骤之后和步骤(d)之前使所述扩增模板变性。

7.权利要求6的方法，其中所述富集珠粒包含俘获寡核苷酸，该俘获寡核苷酸包含与所述扩增模板至少部分互补的序列，使得所述包含扩增模板的乳剂珠粒在步骤(c)中通过杂交结合至所述富集珠粒。

8.权利要求1的方法，其中滤膜位于旋转柱上。

9.权利要求8的方法，其中在步骤(d)过程中离心所述旋转柱，以便有利于所述未被俘获的乳剂珠粒通过所述滤膜。

10.权利要求2的方法，其中通过离心使所述包含扩增模板的乳剂珠粒与所述富集珠粒分离。

11.权利要求1的方法，其中所述富集珠粒在大小上不同于所述乳剂珠粒。

12.权利要求11的方法，其中所述富集珠粒是所述乳剂珠粒的至少5倍大且至多100倍大。

13.权利要求1的方法，其中至少一部分所述富集珠粒结合多于一个的所述包含扩增模板的乳剂珠粒。

14.权利要求1的方法，其中所述PCR试剂包含在缓冲液中的核苷酸和聚合酶。

15.权利要求1的方法，其中所述模板包含剪切的DNA片段。

16.权利要求15的方法，其中所述剪切的DNA片段包含3'和5'衔接子。

17.权利要求16的方法，其中所述第一种PCR引物和所述第二种PCR引物与所述衔接子之一的一部分互补。

18.权利要求2的方法，其中所述乳剂珠粒是磁性的，并且使与所述富集珠粒分离的所述乳剂珠粒暴露于磁体。

19.权利要求1的方法，其中所述暴露于步骤(b)的条件包括温度循环。