[发明专利]全基因组甲基化测序文库及其构建方法有效
| 申请号： | 201410788846.6 | 申请日： | 2014-12-17 |
| 公开（公告）号： | CN104532360A | 公开（公告）日： | 2015-04-22 |
| 发明（设计）人： | 王苗英;朱海浩;蒋智;李明洲;王大伟;刘运超;曹志生 | 申请（专利权）人： | 北京诺禾致源生物信息科技有限公司 |
| 主分类号： | C40B50/06 | 分类号： | C40B50/06;C40B40/06;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人： | 吴贵明;张永明 |
| 地址： | 102208 北京市昌平区*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基因组 甲基化 序文 及其 构建 方法 | ||
1.一种全基因组甲基化测序文库的构建方法，其特征在于，所述构建方法包括以下步骤：
S1，对所述全基因组DNA进行片段化，得到DNA片段；
S2，采用dATP、dTTP和dGTP混合形成的dNTP对所述DNA片段进行末端修复，得到修复片段；
S3，对所述修复片段进行3’末端加“A”，得到3’末端带“A”片段；
S4，采用经过“C”到“T”转化处理的接头序列对所述3’末端带“A”片段进行接头连接，得到带接头的片段；
S5，对所述带接头片段进行“C”到“T”转化处理，得到处理片段；
S6，对所述处理片段进行扩增，得到所述全基因组甲基化测序文库。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S1之后，以及所述步骤S2之前，所述构建方法还包括对所述DNA片段进行纯化的步骤。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述纯化的步骤采用DNA亲和柱进行纯化。
4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述纯化的步骤采用QIAquick PCR纯化试剂盒中的所述DNA亲和柱对所述DNA片段进行纯化。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S2中，采用End-It试剂盒中的dATP、dTTP和dGTP混合形成的dNTP对所述DNA进行末端修复，得到所述修复片段。
6.根据权利要求1或5所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S2之后，以及所述步骤S3之前，所述构建方法还包括对所述修复片段进行纯化的步骤。
7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S3之后，以及所述步骤S4之前，还包括采用Ampure XP磁珠对所述3’末端带“A”片段进行纯化的步骤。
8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S4之后，以及所述步骤S5之前，所述构建方法还包括对所述带接头片段进行定量的步骤。
9.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在所述步骤S5中，采用EZ DNA Methylation-LightningTM试剂盒对所述带接头片段进行“C”到“T”转化处理，得到所述处理片段。
10.一种全基因组甲基化测序文库，其特征在于，采用权利要求1至9中任一项所述的构建方法构建而成。
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