[发明专利]一种甲基化DNA的测序方法及其应用

权利要求书

1.一种甲基化DNA的测序方法，其特征在于，包括如下步骤： 

1)DNA样品的片段化； 

2)将1)中得到的DNA片段与羟甲基化修饰的寡核苷酸接头连接； 

3)富集步骤2)中的甲基化DNA片段； 

4)将步骤3)中得到的产物中未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶碱基； 

5)将4)中的单链DNA通过引物进行扩增以获得双链DNA； 

6)去除接头回收纯化DNA； 

7)对步骤6)中获得的双链DNA进行测序。 

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)包括： 

a)将基因组DNA片段化成为DNA片段； 

b)将所述DNA片段进行末端修复以获得具有平末端的DNA片段； 

c)将b)中得到的DNA片段的3’末端加上A碱基。 

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述羟甲基化修饰的寡核苷酸接头中所有的碱基胞嘧啶都是羟甲基化的。 

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中的富集羟甲基化DNA通过MeDIP技术进行。 

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中通过亚硫酸盐处理试剂盒将DNA中未甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶碱基。 

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)中通过高保真DNA聚合酶将单链DNA进行扩增以获得双链DNA。 

7.根据权利要求1所述方法构建得到的DNA测序文库。 

8.一种试剂盒，其中至少包含所述用于DNA末端修复的试剂、DNA 3’端加A的试剂、羟甲基化修饰的接头试剂、通过MeDIP技术富集甲基化DNA的试剂、用于将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶的亚硫酸氢盐试剂、用于扩增的试剂、用于胶回收的试剂。 

9.根据权利要求8所述的试剂盒，所述扩增的试剂包括引物。 

10.权利要求8的试剂盒用于建立甲基化DNA文库或者用于甲基化DNA测序的用途。