[发明专利]DNA标签、PCR引物及其应用

说明书

本发明公开了DNA标签、PCR引物及其应用，其中一组DNA标签，其选自SEQ ID NO：1‑95所示的核苷酸，能够用于构建核酸测序文库，以精确地对核酸测序文库进行区分。利用本发明的DNA标签和PCR引物构建标签PCR引物，进而利用该标签PCR引物，根据本发明的确定多种DNA样品耳聋基因是否存在突变的方法，一次性最多能够实现95种DNA样品的耳聋基因突变检测。

技术领域

本发明涉及核酸测序及分型技术领域，具体地，涉及DNA标签、PCR引物及其应用，更具体地，涉及一组DNA标签、一组PCR引物、构建核酸测序文库的方法、确定DNA样品耳聋基因是否存在突变的方法、用于确定DNA样品耳聋基因是否存在突变的试剂盒以及确定DNA样品耳聋基因是否存在突变的系统。

背景技术

耳聋是一种严重影响生活质量和交流的常见疾病。根据2006年第二次全国残疾人抽样调查，我国残疾人群8296万，其中听力残疾人群2780万，7岁以下的聋哑儿童高达80万，并以每年新生3万聋儿的速度增长。婴幼儿聋病发生60％-70％是由遗传因素导致的。迄今为止，与非综合征型耳聋相关的40个常染色体隐性遗传基因，27个常染色体显性遗传基因，3个X连锁遗传基因，2个线粒体遗传基因已经被克隆。而每个基因中又有数目众多的耳聋致病突变位点，其中以GJB2、SLC26A4和12S rRNA的突变最为常见，其它基因所占比例较小。

国内研究人员也针对中国人群耳聋的突变类型进行了大规模的流行病学调查。根据近几年的分子流行病学调查，上述3个基因和GJB3的突变比例高达40％。

耳聋早期检测的意义：第一时间发现聋病易感基因携带者及迟发型听力损失高危儿，做到早发现早干预；辅助耳聋病因诊断；检测出药物性耳聋基因携带者，指导抗生素的应用，避免药物性耳聋的发生；进行流行病学调查。因此耳聋突变基因的早发现对于聋病的预防和治疗具有重要意义。

目前传统的耳聋基因检测方法包括单链构象多态性(PCR-SSCP)，限制性片段长度多态(PCR-RFLP)，变性高效液相色谱分析(DHPLC)，直接测序，基因芯片、飞行时间质谱检测技术等方法。这些检测方法存在较多局限性，或者检测能力低、或者通量低耗时费力、所需设备和耗材昂贵，更重要的是，这些方法除基因芯片的方法，难以同时将不同基因的多个突变位点进行高通量的检测，然而基因芯片的平台价钱昂贵，对仪器和人员的素质要求较高，难以在我国广大医疗机构中普及。

并且上文描述的那些检测方法，通量都较低。当对大规模的样品进行耳聋基因检测时，应用上述方法是耗时耗力的，并且成本高昂。因此，本领域迫切需要新的高通量、低成本的耳聋基因检测方法，以实现快速检测和规模化人群检测。

发明内容

本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出一种能够高通量、低成本、快速高效地对DNA样品尤其是多个DNA样品进行耳聋基因突变检测的方法。

因而，根据本发明的一个方面，本发明提供了一组DNA标签。根据本发明实施例的一组DNA标签，其选自SEQ ID NO：1-95所示的核苷酸。本发明的一组DNA标签能够用于构建核酸测序文库，以精确地对核酸测序文库进行区分。利用上述DNA标签(在本文中有时也称为“核酸标签”)，通过将DNA标签与DNA或其等同物相连，可以精确地表征DNA的样品来源。由此，利用上述DNA标签，可以同时构建多种DNA样品的用于测序的核酸测序文库(在本文中，有时也称为DNA标签文库)，从而可以通过将来源于不同样品的核酸测序文库进行混合，同时进行测序，基于DNA标签对获得的测序序列进行分类，获得多种DNA样品的序列信息。从而可以充分利用高通量的测序技术，例如利用Solexa测序技术，同时对多种DNA进行测序，从而提高DNA测序的效率和通量。