[发明专利]一种用于检测腐败酵母菌核苷酸片段的引物、探针及检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于同时检测常见腐败酵母菌的核苷酸片段的引物和探针序列及检测方法和试剂盒。

背景技术

大量酵母的存在可引起食品风味下降或变质，由酵母引起的食品腐败越来越受到重视。酵母不仅在低湿度、低pH值或高盐高糖的食品中抵抗力较强，同时对防腐剂、冷冻、电离辐射照射的抵抗力强，随着食品防腐剂及电离辐射照射等相关技术的应用，普通致病性或腐败性细菌被有效杀灭，酵母则成为引起食品变质的优势菌酵。在常见的发酵食品、海产食品、腌制食品等食品中很容易发生酵母引起的腐败，腐败酸奶中可分离出汉逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus)、解脂耶罗维亚酵母(Yarrowia lipolytaca)；在半软和软奶酪中，假丝酵母属、蔷薇酵母属和隐球酵母等会引起臭味、软化、产气、变色和涨袋；诞沫假丝酵母(Candida zeylanoides)、逊德巴利酵母(Debaryomyces hansenii)、清酒假丝酵母(Candida sake)等酵母都能引起火腿、香肠等肉制品感官品质的改变引起腐败。食品中常见腐败酵母如表1所示，酵母引起的食品变质和腐败给食品工业造成巨大的安全风险，因此寻找一个快速简便、能同时检测多种食品种腐败性和致病性酵母的检测方法意义重大。

目前检测酵母菌的方法有传统的培养法、抗体抗原免疫法、聚合酶链式反应(PCR)技术等。传统的培养法方便、成本低，但所需时间至少要5天，无法适应现代高通量快速检测的需求；抗体抗原免疫法具有较高的灵敏度和特异性，但存在成本较高、筛选抗体困难和不能同时检测多种抗原的能力，无法满足食品中多种食品种腐败性和致病性酵母同时检测的要求。传统PCR特异性强、灵敏度高、快速、简便，但有易受到污染，需要使用有毒试剂EB等缺点，实时荧光定量PCR是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术，不但具备传统PCR的优点，而且克服了易受到污染，需要使用有毒试剂EB等缺点，该检测方法具有快速、简便、直观、定量准确等优势，已被成功应用于临床疾病诊断、动物疾病检测、食品安全、科学研究等多种领域的研究检测。

表1食品中常见腐败型酵母

编号属名1假丝酵母属(Candida)2隐球酵母属(Cryptococcus)3地丝菌属(Geotrichum)4蔷薇酵母属(Rhodotorula)5接合酵母属(Zygosaccharomyces)6德克/酒香酵母(Dekkera/Brettanomyces)7裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)8异常毕赤酵母(Wickerhamomyces(Pichia)anomala)

发明内容

本发明的目的是提供一种用于同时检测食品中常见腐败酵母菌的核苷酸片段的引物和探针序列。

基于上述目的，本发明采用以下技术方案：