[发明专利]一种DNA分子及其在制备糖尿病鼠模型中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种DNA分子及其在制备糖尿病鼠模型中的应用。

背景技术

医学研究需要大量建立与人类疾病病理相关的动物模型。能够模拟和体现2型糖尿病病理变化的动物模型将有助于人们更好地理解疾病的本质，为2型糖尿病的预防和治疗提供理论基础，可为药物靶点筛选、新药开发、新型治疗方式的发现提供试验对象。

使用基因工程技术制备小鼠和小型猪等动物模型，对动物模型的基因组加以改造，可通过转入相关基因，并使之上调表达的方法建模，在胰岛素抵抗与胰岛素分泌缺陷双途径模拟研究人类2型糖尿病，比其他方法制备的动物模型更理想。

发明内容

本发明的目的是提供一种DNA分子及其在制备糖尿病鼠模型中的应用。

本发明提供了一种DNA分子，包括表达盒甲和表达盒乙，所述表达盒甲用于表达猪HSD11B1基因，所述表达盒乙用于表达CHOP基因和hIAPP基因；所述猪HSD11B1基因编码序列表的序列3所示的蛋白质；所述CHOP基因表达序列表的序列4所示的蛋白质；所述hIAPP基因编码序列表的序列5所示的蛋白质。

所述猪HSD11B1基因具体可如序列表的序列1自5’末端第3327-4205位核苷酸所示。所述CHOP基因具体可如序列表的序列1自5’末端第7592-8095位核苷酸所示。所述hIAPP基因具体可如序列表的序列1自5’末端第8180-8449位核苷酸所示。

所述表达盒甲中，可由PAPOE启动子启动所述猪HSD11B1基因的表达。所述表达盒乙中，可由PIP启动子启动所述CHOP基因和所述hIAPP基因的表达。

所述PAPOE启动子具体可如序列表的序列1自5’末端第1675-3311位核苷酸所示。所述PIP启动子具体可如序列表的序列1自5’末端第6102-7591位核苷酸所示。

所述DNA分子自上游至下游依次可包括如下元件：绝缘子、所述PAPOE启动子、所述猪HSD11B1基因、BGHpA加尾信号、所述绝缘子、所述PIP启动子、所述CHOP基因、F-2A序列、所述hIAPP基因、所述BGHpA加尾信号；所述绝缘子如序列表的序列1自5’末端第7-1674位核苷酸所示；所述PAPOE启动子如序列表的序列1自5’末端第1675-3311位核苷酸所示；所述BGHpA加尾信号如序列表的序列1自5’末端第4209-4433位核苷酸所示；所述PIP启动子如序列表的序列1自5’末端第6102-7591位核苷酸所示；所述F-2A序列如序列表的序列1自5’末端第8096-8179位核苷酸所示。

所述DNA分子具体可为如下(a)或(b)：(a)序列表的序列1自5’末端第7-8674位核苷酸所示的DNA分子；(b)序列表的序列1自5’末端第7-8832位核苷酸所示的DNA分子。

含有所述的DNA分子重组载体、表达盒或转基因细胞系均属于本发明的保护范围。

所述重组载体具体可为在pcDNA3.1(+)载体的多克隆位点插入所述DNA分子得到的重组质粒。

所述重组载体具体可为将pcDNA3.1(+)载体MulⅠ和NotⅠ酶切位点之间的小片段(PCMV片段)取代为所述DNA分子得到的重组质粒。

本发明还保护以上任一所述的DNA分子或重组载体的应用，为如下(1)或(2)或(3)或(4)：(1)制作糖尿病鼠模型；(2)诱发小鼠发生胰岛素抵抗；(3)制备用于制作糖尿病鼠模型的试剂盒；(4)制备用于诱发小鼠发生胰岛素抵抗的试剂盒。

本发明还保护一种试剂，包括以上任一所述的DNA分子或重组载体；所述试剂的用途为如下(1)或(2)或(3)或(4)：(1)制作糖尿病鼠模型；(2)诱发小鼠发生胰岛素抵抗；(3)制备用于制作糖尿病鼠模型的试剂盒；(4)制备用于诱发小鼠发生胰岛素抵抗的试剂盒。

所述糖尿病鼠模型为满足如下条件的小鼠：空腹血糖值高于≥6.7mmol/L且糖耐量试验120min时刻血糖值≥10.1mmol/L。