[发明专利]牦牛乳糖巨肽及牦牛乳小分子肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及制备糖巨肽及小分子肽的制备方法。

背景技术

牦牛乳糖巨肽是一种含有唾液酸的活性糖肽，由κ-牦牛乳分子中的106-169氨基酸残基组成，约占乳清蛋白含量的15%～25%。糖巨肽具有不同的种类，主要是由于其不同的糖基化和磷酸化结构。糖巨肽的氨基酸组成中缺少芳香氨基酸，而支链氨基酸却很多。糖巨肽的糖链主要有以O-糖苷型结合的2种中性糖链和3种酸性糖链，90%以上的结合糖链都含唾液酸。

目前制备糖巨肽的方法主要是直接提取法，还有酶解法。酶解法是制备糖巨肽常用的方法，最关键就是选择合适的酶和确定合适的水解条件。制备糖巨肽的酶要具有专一性切断芳香族氨基形成的肽键，并且较少作用于其他氨基酸形成的肽键。

肽是经过蛋白催化降解获得的小分子片段，它具有极强的生物活性和多样性，食后不但不会引起人们担心的“营养过剩”，相反，它还可以平衡调节营养，改善“营养过剩”和“营养缺乏”的症状。酶法生产的小分子活性多肽可全面调节人体生理功能，增强人体生理活性，是现代人的前沿营养。

牦牛乳是西北特有的资源，利用牦牛乳生产功能性肽，可以拓宽牦牛乳系列产品的种类，延长乳制品资源的货架期，间接提高牦牛乳的营养价值及附加值。

发明内容

本发明的目的在于避免现有技术的不足，提供一种牦牛乳糖巨肽的制备方法。

本发明的又一目的提供一种牦牛乳小分子肽的制备方法。

最大限度的对牦牛乳进行开发利用，得到了牦牛乳糖巨肽及小分子肽的生产工艺，有效的提高了牦牛乳的利用率，适合工业化推广。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种牦牛乳糖巨肽的制备方法，其主要特点是包括以下步骤：

（1）脱脂：采用牛奶分离机，4000-8000r/min，对牦牛乳进行脱脂处理。

（2）酶解：调节脱脂牦牛乳温度在37℃～50℃，加入牦牛乳体积/凝乳酶质量V/M为0.5%～2%的凝乳酶，酶解40～90min；

（3）灭酶：酶解结束后，升温至80～100℃，灭酶5～15min；

（4）离心：4000～10000g离心力，离心5～15min。分部收集上清液和沉淀。

（5）上清液通过截留分子量为6000Da的超滤膜超滤除盐，截留液喷雾干燥，得到牦牛乳糖巨肽。

所述的牦牛乳糖巨肽的制备方法，所述原料为牦牛乳。用超滤膜设备进行除盐及分离牦牛乳糖巨肽。

所述的牦牛乳糖巨肽的制备方法，步骤（2）中所述的酶为凝乳酶，其活力为200000U/g。

一种牦牛乳小分子肽的制备方法，其主要特点是包括以下步骤：

（1）取上述步骤（4）中离心后沉淀，配置成1～10%的溶液，调pH6.5～8.5；添加底物量为0.5%～2%的复合蛋白酶，在45℃～65℃酶解1～4个小时；

（2）酶解结束后，80～100℃，灭酶5～10min；冷却至10～50℃左右，以无机酸调pH为4.1，4000～10000g离心力，离心5～15min；用平均截留分子量为6000Da的超滤膜，除高分子蛋白；150℃～180℃干燥透过液，得到所述牦牛乳酪蛋小分子肽。

所述的牦牛乳小分子肽的制备方法，所述原料为糖巨肽制备过程中的离心沉淀，配置成1～10%的溶液。

所述的牦牛乳小分子肽的制备方法，步骤（1）中所述的酶为复合蛋白酶。

所述的牦牛乳小分子肽的制备方法，步骤（2）中所述的无机酸为盐酸，无机碱为氧氧化钠溶液。

牦牛乳糖巨肽含量的检测：

牦牛乳糖巨肽纯度的测定

紫外吸收法测定牦牛乳糖巨肽纯度：糖巨肽的化学特征为不含芳香族氨基酸，只有205nm～217nm处的紫外吸收，在280nm处没有紫外吸收。因此，210nm与280nm处的紫外吸收差值可用于牦牛乳糖巨肽纯度的评价。

计算如公式：

牦牛乳糖巨肽含量的测定