[发明专利]一种木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷制备方法及用途

权利要求书

1.一种木犀草素-7- o-β-D-葡萄糖醛酸苷制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A、提取：称取苦碟子，向苦碟子中加10-15倍量40-70%乙醇浸泡1-3小时，回流提取两次，每次2小时，合并提取液，在40-60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为0.8-1.2g/ml的浓缩液Ⅰ；

B、水沉：向浓缩液Ⅰ中加入3-6倍量去离子水，4-10℃冷藏，过滤，滤液备用；

C、纯化：将B步骤中所得滤液依次经过HZ820大孔吸附树脂纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取HZ820大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3.5-4.0条件下，将滤液上样，上样流速为2-4BV/h，上样后饱和1小时；再用PH3.5-4.0的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4-6BV/h，洗脱用量为4-6BV；再用60%乙醇洗脱，洗脱流速6-8BV/h，洗脱用量为6-8BV，收集洗脱液，在40-60℃条件下减压浓缩得到浓度为0.2-0.5g/ml浓缩液Ⅱ； 聚酰胺纯化，聚酰胺为30-60目，聚酰胺与生药质量比为1:6，将浓缩液Ⅱ上样，上样流速为2-4BV/h，上样后饱和1h，先用14-16BV水以流速4-6BV/h洗脱，再用10-12BV 20%乙醇以流速4-6BV/h洗脱，除去杂质，然后再用14-16BV的70%乙醇以流速6-8BV/h洗脱，收集洗脱液，在40-60℃条件下减压浓缩得到浓度为0.9-1.1g/ml浓缩液Ⅲ；XAD7HP大孔吸附树脂纯化，按照树脂与生药质量比为2.03:1称取XAD7HP吸附树脂，湿树脂装柱，将浓缩液Ⅲ调PH8.5-9.0上样，上样流速为1-2BV/h，上样后饱和30分钟，再用4-5BV的10%乙醇以流速6-8BV/h洗脱，收集洗脱液，在40-60℃条件下减压浓缩得到浓度为12-15g/ml浓缩液Ⅳ； 高压制备色谱或中压制备色谱纯化两次，然后按照色谱峰收集目标化合物，然后减压浓缩、冷冻干燥即得，其中所述高压制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3，纯化两次，按照色谱峰收集木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液；所述中压制备色谱纯化步骤如下：中压制备色谱的C18填料与生药质量比为1:6，纯化两次，按照色谱峰收集木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A、提取：称取苦碟子，向苦碟子中加10倍量40%乙醇浸泡1-3小时，回流提取两次，每次2小时，合并提取液，在60℃条件下减压浓缩得到生药浓度为1.2g/ml的浓缩液Ⅰ；

B、水沉：向浓缩液Ⅰ中加入6倍量去离子水，4℃冷藏，过滤，滤液备用；

C、将B步骤中所得滤液经过大孔吸附树脂Ⅰ纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取HZ820大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH3.5-4.0条件下，将滤液上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和1小时；再用PH3.5的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为4BV/h，洗脱用量为6BV；再用60%乙醇洗脱，洗脱流速6BV/h，洗脱用量为8BV，收集洗脱液，在60℃条件下减压浓缩得到浓度为0.2g/ml浓缩液Ⅱ；

D、将步骤C中所得浓缩液Ⅱ通过聚酰胺纯化，聚酰胺为30目，聚酰胺与生药质量比为1:6，将浓缩液Ⅱ上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和1h，先用16BV水以流速4BV/h洗脱，再用12BV 20%乙醇以流速4BV/h洗脱，除去杂质，然后再用16BV的70%乙醇以流速8BV/h洗脱，收集洗脱液，在60℃条件下减压浓缩得到浓度为0.9g/ml浓缩液Ⅲ；

E、将步骤D中所得浓缩液Ⅲ通过大孔吸附树脂Ⅱ，按照树脂与生药质量比为2.03:1称取XAD7HP吸附树脂，湿树脂装柱，将浓缩液Ⅲ调PH8.5上样，上样流速为1BV/h，上样后饱和30分钟，再用4BV的10%乙醇以流速6BV/h洗脱，收集洗脱液，在60℃条件下减压浓缩得到浓度为15g/ml浓缩液Ⅳ；

F、将步骤E中所得浓缩液Ⅳ通过高压制备色谱纯化，高压制备色谱的C18填料与生药质量比为1:3，纯化两次，按照色谱峰收集木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

A、提取：称取苦碟子，向苦碟子中加12倍量40-70%乙醇浸泡2小时，回流提取两次，每次2小时，合并提取液，在50℃条件下减压浓缩得到生药浓度为1.0g/ml的浓缩液Ⅰ；

B、水沉：向浓缩液Ⅰ中加入4倍量去离子水，6℃冷藏，过滤，滤液备用；

C、将B步骤中所得滤液经过大孔吸附树脂Ⅰ纯化，按照树脂与生药的质量比为1:1.5称取HZ820大孔吸附树脂，湿树脂装柱，在PH4.0条件下，将滤液上样，上样流速为3BV/h，上样后饱和1小时；再用PH4.0的10%乙醇洗去杂质，洗脱流速为5BV/h，洗脱用量为5BV；再用60%乙醇洗脱，洗脱流速7BV/h，洗脱用量为7BV，收集洗脱液，在50℃条件下减压浓缩得到浓度为0.3g/ml浓缩液Ⅱ；

D、将步骤C中所得浓缩液Ⅱ通过聚酰胺纯化，聚酰胺为50目，聚酰胺与生药质量比为1:6，将浓缩液Ⅱ上样，上样流速为3BV/h，上样后饱和1h，先用15BV水以流速5BV/h洗脱，再用11BV 20%乙醇以流速5BV/h洗脱，除去杂质，然后再用15BV的70%乙醇以流速7BV/h洗脱，收集洗脱液，在50℃条件下减压浓缩得到浓度为1.0g/ml浓缩液Ⅲ；

E、将步骤D中所得浓缩液Ⅲ通过大孔吸附树脂Ⅱ，按照树脂与生药质量比为2.03:1称取XAD7HP吸附树脂，湿树脂装柱，将浓缩液Ⅲ调PH9.0上样，上样流速为2BV/h，上样后饱和30分钟，再用5BV的10%乙醇以流速7BV/h洗脱，收集洗脱液，在50℃条件下减压浓缩得到浓度为13g/ml浓缩液Ⅳ；

F、将步骤E中所得浓缩液Ⅳ通过中压制备色谱纯化，中压制备色谱的C18填料与生药质量比为1:6，纯化两次，按照色谱峰收集木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷药液，然后减压浓缩，冷冻干燥，即得木犀草素-7-o-β-D-葡萄糖醛酸苷。