[发明专利]一种骨肽组合物及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及骨肽的制剂，具体涉及骨肽组合物及其制备方法。

背景技术

骨肽注射液（Ossotide Injection）为复方制剂，其主要成分为有机钙、磷、无机钙、无机盐、微量元素、氨基酸等。骨肽注射液有利于骨折修复。也可用于治疗增生性骨关节疾病及风湿、类风湿关节炎等。

骨肽有盐水、酸水、碱水提取及酶解法去除相关杂质，如：

盐水热压提取、过滤，去脂、离心、醇沉、过柱：CN200510076912.8公开了一种制备骨肽注射剂的方法，将哺乳动物骨用盐水热压煮提，离心过滤，合并煮提液，低温放置1-40小时，去除表层脂肪，温热后离心过滤，真空浓缩后加入乙醇，静置沉淀，吸出上层醇液，定容回收乙醇，得水提液，将水提液加等体积蒸馏水，一次通过弱酸性阳离子树脂柱、弱碱性阴离子树脂柱、珠状壳聚糖柱和壳聚糖改性活性炭柱，去杂纯化，得纯净稀药液。此方法中先醇沉后过柱除杂，得到的药液中可能含有树脂的降解物等污染物，且多种树脂柱的使用造成大量酸性氨基酸或碱性氨基酸的损失。

酸水提取：CN201110094765.2公开一种注射用骨肽的制备工艺，其用哺乳动物四肢骨，除去剩肉，粉碎，水洗后用酸水热压2-3次，冷却，分层，然后水层用无水乙醇沉淀，过滤，用酸调PH为1.0-2.0，过滤，去除沉淀；滤液用碱调PH值为7.8-8.8，过滤，去除沉淀，滤液调PH值近中性，过滤，去除沉淀，然后经超滤膜超滤，截留分子量为3000-10000道尔顿，得到骨肽溶液。酸水解法会使色氨酸全部被破坏，丝氨酸和酪氨酸部分被破坏，并产生二次污染。另外，该专利先醇沉，后酸沉碱沉，由酸沉和碱沉产生的杂质不能很好的去除。

碱溶液提取：CN200610150890.X使用碱性提取、酸性提取的方法提取骨肽，取健康新鲜冷冻的哺乳动物的四肢骨，清洗，压碎，将其置夹层锅中，加入5%氢氧化钠溶液30℃~55℃水解12~48小时，取上清液，调pH值酸沉，加热，冷却静置后过滤。碱水解法使含羟基和巯基的氨基酸，全部被破坏且产生消旋，因此增加了新的杂质。

酶解：CN200610033055.8公开了一种制备方法，取新鲜的动物四肢骨，清洗、消毒、粉碎、加入蒸馏水，在恒温反应罐内以蛋白酶控制水解。

而多数工艺包含提取、去脂、浓缩、醇沉、调酸、调碱、超滤膜过滤，类似上述方法的相关文献很多，具体如下：

热压提取、冷却、去脂，浓缩，醇沉、调酸、调碱：CN200610017008.4公开了一种骨肽注射液制备工艺，该发明将猪四肢骨提取、去脂、浓缩，然后沉淀、浓缩，再进行酸性沉淀、碱性沉淀，将加热后的液体冷至室温后置于冷库中，取出除去酸性蛋白，进行过滤及超滤得到骨肽原液，再加水调解、过滤、灌封、灭菌即得骨肽注射液。醇沉可以去除由酸性沉淀及碱性沉淀产生的杂质，该专利先醇沉，后酸沉碱沉，未能达到除杂的效果。

热压提取、冷藏、去脂、调酸、离心、超滤：CN200510051475.4公开了骨肽提取液的制备方法，取哺乳动物四肢骨，加水热压提取3次，热压温度为115-121℃，时间为1-2小时，压力为0.15-0.2Mpa；合并提取液，冷藏12-48小时，除去上层浮脂，上清液调pH值2.0~3.0，放置12-24小时，滤过，滤液加热65-80℃，时间为15-20分钟，冷却后离心，离心条件为3000-4000转/分，离心时间为15-30分钟，过滤，得清液，清液用截留分子量10000以下的超滤膜超滤1-2次，超滤得到骨肽提取物。该发明中仅去除碱性蛋白，未除酸性蛋白。

热压提取、去脂、调酸、醇沉、调中性、调碱：CN200710099629.6提供了一种骨肽注射剂的制备方法，该制备方法包括以下步骤：将猪或牛的四肢骨，洗净、打碎，加入1-4倍重量的纯化水，105-120℃高压提取至少2次，每次1-3小时，合并提取液，过滤，冷藏，除去上层油脂，调pH值1.0-4.0，煮沸，冷藏；过滤，取上清液，减压浓缩，加入乙醇，使其含醇量达到60-80%，静置，过滤，回收乙醇至无醇味，用注射用水稀释，调节pH值6.0-8.0，过滤，灭菌，冷冻，缓化后室温放置，过滤，调pH值6.8-7.2，脱色，调pH值6.8-7.2，灭菌，冷冻至结冰，取出缓化，用注射用水将缓化后的药液稀释，调节pH值6.8-7.5，精滤，得到骨肽注射液。该发明先醇沉，后去除酸性蛋白，且调节pH至弱碱性，不能有效去除酸性蛋白及其杂质。