[发明专利]用于生产L-2-氨基丁酸的载体、工程菌株及方法

权利要求书

1.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体具有编码苏氨酸脱氨酶的多核苷酸序列和编码L-氨基酸脱氢酶的多核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的重组载体，其特征在于，编码苏氨酸脱氨酶的多核苷酸序列选自下组：

大肠杆菌来源的ilvA基因、大肠杆菌来源的TdcB基因、芽孢杆菌来源的ilvAbs基因、鼠伤寒沙门氏菌来源的苏氨酸脱氨酶基因、或拟南芥来源的苏氨酸脱氨酶基因。

3.如权利要求2所述的重组载体，其特征在于，编码苏氨酸脱氨酶的多核苷酸序列为：大肠杆菌来源的ilvA基因或大肠杆菌来源的TdcB基因。

4.如权利要求1所述的重组载体，其特征在于，编码L-氨基酸脱氢酶的多核苷酸序列选自下组：

芽孢杆菌来源的L-亮氨酸脱氢酶编码基因、芽孢杆菌来源的L-丙氨酸脱氢酶编码基因、古球菌来源的L-丙氨酸脱氢酶编码基因、链霉菌来源的L-缬氨酸脱氢酶编码基因、嗜热放线菌来源的L-苯丙氨酸脱氢酶编码基因、嗜热芽孢杆菌来源的L-亮氨酸脱氢酶编码基因、或芽孢杆菌来源的L-苯丙氨酸脱氢酶编码基因。

5.如权利要求4所述的重组载体，其特征在于，编码L-氨基酸脱氢酶的多核酸序列选自下组：

芽孢杆菌来源的L-亮氨酸脱氢酶编码基因，嗜热芽孢杆菌来源的L-亮氨酸脱氢酶编码基因，或链霉菌来源的缬氨酸脱氢酶基因。

6.如权利要求1所述的重组载体，其特征在于，所述的重组载体从5’端到3’端依次具有：第一启动子、苏氨酸脱氨酶编码序列和第一终止子、L-氨基酸脱氢酶编码序列和第二终止子。

7.一种宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求1-6任一所述的载体或基因组中整合有权利要求1-6任一所述的多核苷酸序列。

8.如权利要求7所述的宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞的染色体具有选自下组的至少一个特征：

(1)天冬氨酸激酶I基因thrA的1034位碱基发生C→T突变；

(2)天冬氨酸激酶III基因lysC的1055位碱基发生C→T突变；

(3)磷酸烯醇丙酮酸羧化酶基因ppc启动子为trc启动子；

(4)乙酰-CoA合成酶基因acs启动子为trc启动子；

(5)选自下组的至少一个基因失活或敲除：二氨基庚二酸盐脱羧酶基因lysA、高丝氨酸琥珀酰转移酶基因metA、苏氨酸脱氢酶基因tdh、苏氨酸转运酶基因tdcC和调控基因iclR。

9.权利要求7-8任一所述的宿主细胞在制备L-2-氨基丁酸中的用途。

10.一种生产L-2-氨基丁酸的方法，其特征在于，包括步骤：

(i)在合适的培养条件下，培养权利要求7所述的宿主细胞；和

(ii)从(i)的培养物中分离出所述的L-2-氨基丁酸。