[发明专利]O139群霍乱弧菌检测用组合物、试剂盒和检测方法

权利要求书

1.一种用于特异性检测样品中O139群霍乱弧菌的组合物，其中包括下列 引物：上游引物：5′-TgATgTTgTgggATAAgCAATCTT-3′，

下游引物：5′-CTCAgCAATgCggTggTCTA-3′。

2.如权利要求1所述的组合物，其中进一步包括探针：

5′-荧光基团-AACCCgCCCTTCTAATgAACACgCCA-荧光淬灭基团-3′。

3.如权利要求2所述的组合物，其中所述荧光基团为Tet，所述荧光淬灭 基团为ECLIPSE。

4.如权利要求1所述的组合物，其中进一步包括另一对引物：

上游引物：5′-ATgCCAAgAggACAgAgTgAgT-3′，

下游引物：5′-TCAAACTAATTgAggTggAAACATATCC-3′。

5.如权利要求4所述的组合物，其中进一步包括探针：

5′-荧光基团-AACCCgCCCTTCTAATgAACACgCCA-荧光淬灭基团-3′， 和

5′-荧光基团-TCgTgCCTAACAAATCCCgTCTgAgTTCCT-荧光淬灭基团 -3′，并且在两个探针中分别使用不同的荧光基团。

6.如权利要求5所述的组合物，其中所述的两对荧光基团和荧光淬灭基团 为：Tet和ECLIPSE，以及FAM和ECLIPSE。

7.一种用于特异性检测样品中O139群霍乱弧菌的试剂盒，其中包括PCR 反应体系，和权利要求1～6中任一项所述的组合物。

8.如权利要求7所述的试剂盒，其中所述PCR反应体系为实时定量PCR 反应体系。

9.一种特异性检测样品中O139群霍乱弧菌的方法，包括：

提取样品中的细菌基因组DNA；

使用权利要求1～6中任一项所述的组合物，或使用权利要求7或8所述的 试剂盒，用PCR法扩增所述细菌基因组DNA；

对PCR反应的结果进行分析，

其中，所述样品为食品。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述PCR法的反应条件为：

95±2℃预变性超过1min，95±2℃变性超过5s，60±2℃延伸超过10s，共 反应超过30个循环，最后在72±2℃下延伸超过2min；或

95±2℃预变性超过1min，95±2℃变性超过5s，60±2℃延伸超过10s，共 反应超过30个循环。