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[发明专利]pSFV-p54复制子颗粒及其制备方法与应用-CN202110968210.X在审
发明人：方倪冉;郑航辉;温良海;杨斌;徐婷 -专利权人：华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司
申请日： 2021-08-23 - 公布日： 2021-11-16 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，公开了一种pSFV‑p54复制子颗粒及其制备方法与应用。所述pSFV‑p54复制子颗粒的制备方法，包括以下步骤：(1)以pSFV‑sp6‑EGFP质粒和flag‑p54基因为材料，构建得到pSFV‑sp6‑p54质粒；所述flag‑p54基因如SEQ IDNO：1所示；(2)分别将SFV‑helper辅助质粒和所述pSFV‑sp6‑p54质粒线性化并进行体外转录，将所得mRNA共电转入BHK细胞或Vero细胞中，得到pSFV‑p54复制子颗粒。本发明通过以塞姆利基森林病毒为载体，插入非洲猪瘟p54基因，所制得的pSFV‑p54复制子颗粒能够高效表达非洲猪瘟病毒p54蛋白，且具有较高的生物安全性，可应用于研制非洲猪瘟相关疫苗。
psfv p54 复制子颗粒及其制备方法应用

[发明专利]一种非洲猪瘟病毒的LAMP-TaqMan快速检测试剂盒及应用-CN201910370255.X在审
发明人：崔尚金;汤新明;贾亚雄;梁琳;李金祥 -专利权人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所
申请日： 2019-05-06 - 公布日： 2020-11-06 - 主分类号： C12Q1/70 文献下载
摘要：所述LAMP TaqMan Mix混合液包括：Bst 5.0DNA聚合酶混合液；所述LAMP TaqMan Assay反应液包括：引物：ASFV P54 F3和ASFV P54B3，ASFV P54 LoopF和ASFV P54 LoopR，ASFV P54 FIP和ASFV P54 BIP以及荧光探针P54 FAM Probe。所述引物和探针对应于非洲猪瘟病毒p54基因的高度保守片段。本发明还公开了一种制备上述非洲猪瘟病毒LAMP‑TaqMan快速检测试剂盒的方法及使用其检测样品的方法。
一种非洲猪瘟病毒 lamp taqman 快速检测试剂盒应用

[发明专利]非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备方法、表位鉴定及应用-CN202011556967.X有效
发明人：高飞;曹云雷;童光志;童武;郑浩;姜一峰 -专利权人：中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心）
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2022-05-17 - 主分类号： C07K14/01 文献下载
摘要：本发明涉及一株针对ASFV p54蛋白单克隆抗体的制备方法、表位鉴定以及应用。通过将分析p54蛋白的优势抗原表位，选取合适的区域克隆到pET‑30a载体中，构建出原核表达载体pET‑30a‑p54‑JD,将表达的p54蛋白纯化后免疫Balb/c小鼠，经过四次免疫后取小鼠脾细胞与骨髓瘤SP2/0细胞进行融合制备杂交瘤细胞，然后利用间接ELISA方法进行亚克隆获得抗p54蛋白的单克隆抗体，并鉴定了该抗体所对应的p54蛋白抗原表位。
非洲猪瘟病毒 p54 蛋白单克隆抗体制备方法鉴定应用

[发明专利]表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法及其应用-CN201911159887.8在审
发明人：童光志;高飞;童武;李国新;姜一峰;郑浩;周艳君;虞凌雪;李丽薇;刘长龙 -专利权人：中国农业科学院上海兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心上海分中心）
申请日： 2019-11-23 - 公布日： 2020-03-24 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供了一种表达非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus,ASFV）p54蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）重组质粒的构建方法，以及根据该重组质粒构建的基因工程疫苗及构建方法对rPRRSV‑p54感染孔进行间接免疫荧光，发现视野下出现了抗PRRSV N蛋白的特异性荧光及抗ASFV p54蛋白的特异性荧光。说明该表达非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组PRRSV可以保证外源蛋白ASFV的p54蛋白得到良好的高效的稳定的表达。而有研究表明p54是重要的抗原蛋白，能够用于ASF的疫苗研制。
表达非洲猪瘟病毒 p54 蛋白重组繁殖呼吸综合征构建方法及其应用

[发明专利]一种非洲猪瘟EP153R与P54基因共表达的重组腺病毒载体构建及腺病毒包装方法-CN201910046928.6在审
发明人：张泉;黄明生;谢灵志;朱立麒;殷俊 -专利权人：扬州大学
申请日： 2019-01-18 - 公布日： 2019-05-10 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明提供了一种非洲猪瘟EP153R与P54基因共表达的重组腺病毒载体构建及腺病毒包装方法，属于基因工程技术领域。一种EP153R基因与P54基因过表达腺病毒载体，以pShuttle‑CMV真核表达载体为基础，在多克隆位点处引入CTLA4、EP153R、P54基因。本发明还提供了共表达EP153R、P54基因的重组腺病毒，利用构建得到的pAD‑Shuttle‑CMV‑CTLA4‑EP153R‑P54载体实现腺病毒包装过程，得到能够直接感染动物或真核细胞的腺病毒，从而实现了EP153R与P54基因在真核细胞中共表达的目的，为研究实现EP153R与P54基因共表达的腺病毒疫苗奠定了基础。
基因共表达腺病毒包装构建重组腺病毒载体真核细胞猪瘟基因工程技术真核表达载体多克隆位点基因过表达腺病毒疫苗腺病毒载体重组腺病毒感染动物腺病毒引入研究

[发明专利]表达非洲猪瘟病毒p54、p30、E248R蛋白的重组腺病毒及构建方法-CN202010543058.6有效
发明人：周远成;邝声耀;阴文奇 -专利权人：四川省畜牧科学研究院;畜科生物工程有限公司
申请日： 2020-06-15 - 公布日： 2021-02-19 - 主分类号： C12N15/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒及构建方法，该重组腺病毒感染细胞后可以同步表达非洲猪瘟p54、p30和E248R蛋白，其中p54和p30蛋白融合表达，E248R通过自裂解2A信号肽与p54和p30串联表达。本发明构建了能同时表达p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒载体，使用该载体与腺病毒骨架系统共转染细胞后获得可表达非洲猪瘟病毒p54、p30和E248R蛋白的重组腺病毒，使用该重组腺病毒免疫试验动物后可以刺激试验动物产生特异性的抗体
表达非洲猪瘟病毒 p54 p30 e248r 蛋白重组构建方法

[发明专利]一种非洲猪瘟病毒P30-P54重组融合蛋白及其构建方法和应用-CN202310033146.5有效
发明人：帅丽芳;李红卫;何跃忠;谭凯莹;何敏杰;梁智文;覃刘生;毛莹莹;颜仁和;陈学继 -专利权人：华南生物医药研究院
申请日： 2023-01-10 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种非洲猪瘟病毒P30‑P54重组融合蛋白及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明将P30‑P54的基因序列进行了优化设计，并将优化好的P54、P30序列进行了前后顺序置换，从而大大提高了蛋白的表达量。在此基础上，本发明还构建了重组质粒和杆状病毒，将杆状病毒转染SF9细胞，获得表达非洲猪瘟病毒P30‑P54融合蛋白，为构建表达非洲猪瘟病毒P54‑P30重组融合蛋白的亚单位疫苗奠定了基础。该重组融合蛋白还可用于检测非洲猪瘟病毒抗体，基于该非洲猪瘟病毒P30‑P54重组融合蛋白的特异性，可将其应用于非洲猪瘟病毒抗体检测的研发，从而推动我国非洲猪瘟病毒抗体检测事业的发展。
一种非洲猪瘟病毒 p30 p54 重组融合蛋白及其构建方法应用

[发明专利]一种抗非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备方法及应用-CN202110647535.8在审
发明人：张改平;王爱萍;刘红亮;陈玉梅;梁超;朱习芳;马红芳;庞伟晟 -专利权人：河南中泽生物工程有限公司
申请日： 2021-06-09 - 公布日： 2021-09-17 - 主分类号： C07K16/08 文献下载
摘要：一种抗非洲猪瘟病毒p54蛋白单克隆抗体的制备方法及应用，p54‑H22细胞作为免疫原和p54‑293T细胞作为检测原，所述的p54‑H22细胞用的实验物为雌性Balb/c小鼠，所述的雌性Balb/c小鼠三免一周后采用IPMA方法测定，融合后的细胞的培养基与p54‑293T细胞做IPMA检测筛选阳性杂交瘤细胞株，经三次亚克隆后获得了10株能够稳定分泌抗ASFV p54蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株，用p54‑H22细胞的雌性
一种非洲猪瘟病毒 p54 蛋白单克隆抗体制备方法应用

[发明专利]密码子优化的非洲猪瘟病毒P54基因、其核酸疫苗及应用-CN201410055866.2有效
发明人：孙洁;杨俊兴;廖立珊;胡运发;刘芸;曾少灵;刘建利;林庆燕;陶虹;曹琛福;张彩虹;阮周曦;唐金明;吕建强;花群义 -专利权人：孙洁
申请日： 2014-02-19 - 公布日： 2014-05-21 - 主分类号： C12N15/34 文献下载
摘要：本发明涉及一种经密码子优化的非洲猪瘟病毒P54基因，及基于该基因的核酸疫苗，该核酸疫苗由真核表达载体和经密码子优化的非洲猪瘟病毒P54基因组成。该核酸疫苗的构建是通过如下步骤：P54蛋白密码子优化、设计特异性性引物、人工合成非洲猪瘟病毒P54基因序列转入克隆载体、将纯化后的P54基因重组到真核表达载体中。
密码子优化非洲猪瘟病毒 p54 基因核酸疫苗应用

[发明专利]一种非洲猪瘟病毒p54蛋白抗原表位肽及其应用-CN202011607069.2在审
发明人：王爱萍;张改平;陈玉梅;蒋敏;刘燕凯;周景明;王彦伟;冯景 -专利权人：郑州大学;河南中泽生物工程有限公司
申请日： 2020-12-30 - 公布日： 2021-04-30 - 主分类号： C07K14/01 文献下载
摘要：本发明涉及一种非洲猪瘟病毒p54蛋白抗原表位肽及其应用。本发明筛选出了新的非洲猪瘟病毒p54蛋白抗原表位，完成了对p54蛋白N端B细胞表位的鉴定，完善了p54蛋白的抗原表位图谱。该抗原表位肽及由其衍生的具有同等功能的抗原表位肽能够用于制备非洲猪瘟病毒p54蛋白的特异性抗体、制备检测或鉴定ASFVp54蛋白的试剂，并为研发预防和/或治疗非洲猪瘟病毒感染疫苗奠定了基础。
一种非洲猪瘟病毒 p54 蛋白抗原表位肽及其应用

[发明专利]ASFV-P54蛋白重组方法及利用其制备的夹心ELISA试剂盒-CN201911080865.2在审
发明人：张志;官丽娟;宫枫举;邵钰;韩同福;李翠翠;孙学强 -专利权人：青岛立见诊断技术发展中心
申请日： 2019-11-07 - 公布日： 2020-01-14 - 主分类号： C07K14/01 文献下载
摘要：本发明涉及ASFV‑P54蛋白重组方法及利用其制备的夹心ELISA试剂盒，属于病毒检测领域，所述方法利用的PCR扩增引物，引物序列如SEQ NO.1和SEQ NO.2；这对引物只能扩增p54基因截短的CDS利用所述方法制备的蛋白p54制备的非洲猪瘟病毒夹心ELISA抗体检测试剂盒，包括含有以下组份，ASFV P54抗原包被板、ASFV阳性血清、ASFV阴性血清、20×洗涤液、酶标记的P54抗原、底物溶液A
检测制备夹心ELISA 底物溶液扩增抗体检测试剂盒非洲猪瘟病毒抗原包被板病毒检测蛋白重组目的基因时间缩短血清样本血清样品阳性血清阴性血清引物序列对引物抗逆性酶标记试剂盒洗涤液终止液抗原截短稀释组份蛋白基因

[发明专利]一种非洲猪瘟病毒p54阻断ELISA抗体检测试剂盒及其应用-CN202111137839.6有效
发明人：李鹏宇;张蕾;董春娜;李静;于之清;宗树成;王飞;刘新月;栗利芳;肖进;齐鹏 -专利权人：中牧实业股份有限公司
申请日： 2021-09-27 - 公布日： 2023-10-27 - 主分类号： C07K16/08 文献下载
摘要：本发明公开了一种非洲猪瘟病毒p54阻断ELISA抗体检测试剂盒及其应用。该试剂盒包括包括以非洲猪瘟病毒p54蛋白为包被抗原的的酶联反应板和酶标抗体；所述酶标抗体为与非洲猪瘟病毒p54蛋白特异性结合的单克隆抗体制成的酶标抗体。本试剂盒采用非洲猪瘟病毒p54纯化蛋白和与非洲猪瘟病毒p54蛋白特异性结合的单克隆抗体制备的阻断法酶联免疫抗体检测试剂盒，灵敏度高、特异性强，可以有效地检测样品中非洲猪瘟病毒抗体的含量，与进口试剂盒符合率达
一种非洲猪瘟病毒 p54 阻断 elisa 抗体检测试剂盒及其应用

[发明专利]一种有效区分嵌合非洲猪瘟病毒p54蛋白的重组PRRSV和ASFV的抗体及其应用-CN202211454838.9在审
发明人：高飞;童光志;童武;李丽薇;李国新;周艳君;姜一峰;郑浩;虞凌雪;刘长龙 -专利权人：中国农业科学院上海兽医研究所
申请日： 2022-11-21 - 公布日： 2023-04-25 - 主分类号： C07K16/46 文献下载
摘要：本发明提供一种有效区分嵌合非洲猪瘟病毒p54蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒的疫苗株和野生毒株的抗体及其应用，可以区分嵌合疫苗rPRRSV‑p54、野生型的非洲猪瘟和PRRSV，所述纳米抗体具有较强的抗原特异性，仅与表达非洲猪瘟病毒(ASFV)p54蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒rPRRSV‑p54发生抗原抗体反应，与亲本病毒并没有相应的亲和反应。
一种有效区分嵌合非洲猪瘟病毒 p54 蛋白重组 prrsv asfv 抗体及其应用

[发明专利]一株表达非洲猪瘟病毒P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用-CN202210480604.5在审
发明人：童武;周艳君;童光志;包玮玲;高飞;郑浩;李国新;于海;单同领;姜一峰;虞凌雪;刘长龙;李丽薇;孔宁 -专利权人：中国农业科学院上海兽医研究所
申请日： 2022-05-05 - 公布日： 2023-01-24 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：本发明提供一株表达非洲猪瘟病毒P54基因重组伪狂犬病毒基因工程疫苗及其应用，本研究以PRV JS‑2012‑△gI/gE株为基础，利用同源重组的方法，将现今国内流行的非洲猪瘟病毒的主要抗原蛋白(P54蛋白)的基因序列，插入到载体PRV JS‑2012‑△gI/gE疫苗株中，构建出含非洲猪瘟病毒P54基因序列的重组伪狂犬病毒基因缺失疫苗株rPRV JS‑2012‑ΔgE/gI+P54。经PCR及间接免疫荧光验证，插入的非洲猪瘟病毒P54基因在载体病毒PRV JS‑2012‑△gI/gE中能稳定且高效表达。生物学特性进一步表明：重组病毒rPRV JS‑2012‑ΔgE/gI+P54与亲本病毒PRV JS‑2012‑△gI/gE基本相似。
表达非洲猪瘟病毒 p54 基因重组狂犬病毒基因工程疫苗及其应用

[发明专利]一种制备非洲猪瘟病毒P30、P54酵母疫苗的方法-CN201911286530.6在审
发明人：黄金海;张丽琳;郭艳余;陈琛 -专利权人：天津大学
申请日： 2019-12-13 - 公布日： 2020-04-14 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种制备非洲猪瘟病毒P30、P54酵母疫苗的方法。所述疫苗含有非洲猪瘟病毒强免疫原蛋白P30、膜结构蛋白P54、猪IgG1和IgA1的Fc片段即Fcγ、Fcα以及His纯化标签。本发明包括以下步骤：步骤一、将ASFV病毒免疫原蛋白基因p30、p54与Fcγ、Fcα串联；步骤二、分别构建p30‑Fcγ、p54‑Fcα在酵母内融合表达的转录单位；步骤三、经体外酶连、酵母体内转化及同源重组技术，实现2个转录单位串联，并稳定整合入表面展示型酿酒酵母；步骤四、经过基因组水平和蛋白质水平验证，确认获得2种单独表面展示表达P30‑Fcγ、P54‑Fcα融合蛋白的重组酵母菌株，以及1中同时表面展示表达以上两个融合蛋白的串联复合表达型重组酵母菌株
一种制备非洲猪瘟病毒 p30 p54 酵母疫苗方法

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