本申请涉及基因检测的技术领域,具体公开了一种单碱基延伸引物组及维生素A代谢相关基因多态性的检测方法。单碱基延伸引物组至少包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑15所示引物的一条;其检测方法包括以下步骤:分别设计多重PCR扩增引物组和单碱基延伸引物组后,以多重PCR扩增引物组为引物进行PCR扩增后,进行酶消化反应;随后加入单碱基延伸引物组进行单碱基延伸反应;最后将单碱基延伸产物纯化后进行质谱检测,获得待测标本的维生素A相关基因的多态性。
本发明涉及基因检测技术领域,具体讲,涉及一种维生素K代谢相关基因的分型试剂盒、引物和分型方法。分型试剂盒至少包括核酸扩增试剂和单碱基延伸反应试剂;核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:22所示的PCR扩增引物;单碱基延伸反应试剂中含有如SEQ ID NO:23~SEQID NO:43所示的单碱基延伸引物。分型方法包括:PCR扩增引物进行PCR扩增反应、碱性磷酸酶消化、单碱基延伸引物进行单碱基延伸反应、脱盐处理、高效液相色谱‑质谱联用检测。
本发明涉及基因检测技术领域,具体讲,涉及一种维生素B12代谢相关基因的分型试剂盒、引物和分型方法。分型试剂盒至少包括核酸扩增试剂和单碱基延伸反应试剂;核酸扩增试剂中含有如SEQ ID NO.1~SEQ ID NO.60所示的PCR扩增引物;单碱基延伸反应试剂中含有如SEQ ID NO.61~SEQ ID NO.101所示的单碱基延伸引物。分型方法包括:PCR扩增引物进行PCR扩增反应、碱性磷酸酶消化、单碱基延伸引物进行单碱基延伸反应、脱盐处理、高效液相色谱‑质谱联用检测。
本发明提供了一种基于核酸质谱技术可以同时检测27种呼吸道病原体的引物组、试剂盒和应用,属于病原体核酸检测领域。本发明试剂盒针对临床常见的27种呼吸道病原体设计了PCR扩增引物和单碱基延伸引物。病原菌对应引物和单碱基延伸引物序列见SEQ ID NO:1‑81。本发明的核酸质谱法整合了多重RT‑PCR技术和单碱基延伸技术,通过多重RT‑PCR对病原体目标基因进行扩增,提高检出的灵敏性;单碱基延伸反应通过对延伸引物进行一个碱基扩增,然后通过区分延伸产物分子质量进行病原体识别同时,核酸质谱的通量高,一个反应孔最高可实现40重基因的扩增,借助于芯片技术,单次最高可对384个样本进行分析;具有自动化程度高、检测通量高、灵敏度高、特异性好的优点。
本发明提供了一种CYP2D6基因分型的检测方法,包括:配置包含SEQ ID NO.1~14所示的特异性扩增引物的第一聚合酶链式反应PCR扩增体系,以及包含SEQ ID NO.15~28所示的特异性扩增引物的第二获得第一消化反应体系和第二消化反应体系;配置包含SEQ ID NO.29~49所示的单碱基延伸引物的第一单碱基延伸反应体系,以及包含SEQ ID NO.50~69所示的单碱基延伸引物第二单碱基延伸反应体系;对加入第一单碱基延伸反应体系的第一消化反应体系和加入第二单碱基延伸反应体系的第二消化反应体系进行延伸反应,再进行纯化处理,顺次利用包括有质谱仪的检测仪器进行检测,确定待测样本CYP2D6基因的SNP位点的基因型