本发明涉及一种阔盘吸虫的实时荧光PCR检测引物、探针及其检测方法和应用。一种阔盘吸虫的实时荧光PCR检测引物、探针，包括引物对和探针，所述引物对为如下任一种：a1)由SEQ ID No.1所示的单链DNA和SEQ ID No.2所示的单链DNA组成；a2)由SEQ ID No.1所示的单链DNA和SEQ ID No.2所示的单链DNA经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加后所得序列所示的单链DNA，且与a1)中所述引物对功能相同的引物对。本发明采用的荧光PCR检测方法重复性好，灵敏度高，特异性强，可对胰阔盘吸虫、腔阔盘吸虫和枝睾阔盘吸虫进行筛查，对控制阔盘吸虫感染、传播和防治具有重要意义。
本发明公开了一种犬冠状病毒N蛋白抗原截短体及其应用，所述抗原截短体的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明根据已有和预测的蛋白质三维结构，对犬冠状病毒核衣壳蛋白N蛋白的结构进行了分析，选择稳定性较好的片段，使用大肠杆菌原核表达系统进行表达，经过免疫学实验验证，该抗原蛋白活性高，可以很好地结合抗体，制备的ELISA抗体检测试剂盒所用抗原原料生产成本低，试剂盒特异性好、敏感性高，可以应用于临床犬血清样本中犬冠状病毒抗体检测。
本发明公开了一种特异性结合犬细小病毒VP2蛋白的单克隆抗体在检测试剂中的应用，所述单克隆抗体含有名称为VH的重链可变区和名称为VL的轻链可变区，所述VH和VL均由互补决定区和框架区组成；所述互补决定区由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述单克隆抗体的VH的CDR1~CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.1~3所示；所述单克隆抗体的VL的CDR1~CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.4~6所示。本发明通过昆虫杆状病毒系统表达获得高保守性的VP2蛋白，免疫小鼠获得特异性的单克隆抗体，具有良好的特异性，为建立更准确、更快速的犬细小病毒检测方法奠定了基础。
本发明公开了新型北美萤火虫荧光素酶的变体及应用其的ATP荧光检测试剂。具有北美萤火虫荧光素酶活性的蛋白质变体，其中，SEQ ID NO.1中的第354位的谷氨酸被除谷氨酸以外的氨基酸取代，和/或第405位的脯氨酸被除脯氨酸以外的氨基酸取代，和/或第436位的天冬氨酸被除天冬氨酸以外的氨基酸取代。本发明的ATP荧光检测试剂具有作简便、灵敏、特异、快速且可低温长时间保存的优点，荧光素酶氨基酸突变导致荧光素酶蛋白质空间结构发生改变，增加其热稳定性；并在此基础上摸索糖和一些大分子蛋白对其保护力，进一步提高了该试剂的稳定性。
本发明实施例公开了一种特异性结合口蹄疫病毒O型的单克隆抗体在制备检测口蹄疫病毒O型试剂盒中的应用，所述单克隆抗体为1B8单克隆抗体；其中，所述1B8单克隆抗体含有名称为VH的重链可变区和名称为VL的轻链可变区，所述VH和VL均由互补决定区和框架区组成；所述互补决定区由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述1B8单克隆抗体的VH的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述1B8单克隆抗体的VH的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；所述1B8单克隆抗体的VH的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；所述1B8单克隆抗体的VL的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。试验证明，本发明提供的1B8单克隆抗体制备的检测试剂中，在检测FMD‑O型毒株中，具有很好的灵敏度和特异性。
本发明公开了一种狂犬病病毒糖蛋白抗原、截短体及其应用。如下M1）所示的蛋白质：M1）狂犬病病毒糖蛋白自N端起第20‑69位氨基酸残基和狂犬病病毒糖蛋白自N端起第210‑415位氨基酸残基连接形成，所述狂犬病病毒糖蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明根据已有的蛋白质三维结构，对狂犬病病毒糖蛋白与抗体的结构进行了分析，选择与抗体直接相互作用的稳定性较好的抗原片段，使用真核昆虫表达系统进行表达，该蛋白经过免疫学实验验证，可以很好地结合抗体，该截短体蛋白抗原与抗体的亲和力强，可用于制备高敏感性的诊断试剂盒。
本发明实施例公开了犬传染性肝炎病毒六邻体蛋白抗原、截短体及其应用。如下M1）所示的蛋白质：M1）犬传染性肝炎病毒六邻体蛋白自N端起第118‑481位氨基酸；所述犬传染性肝炎病毒六邻体蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明实施例根据已有和预测的蛋白质三维结构，对犬传染性肝炎病毒蛋白的结构进行了分析，选择稳定性较好的片段，使用原核表达系统进行表达，经过免疫学实验验证，该抗原蛋白可以很好地结合犬传染性肝炎病毒蛋白抗体，利用该抗原制备的抗体检测试剂盒效果好、成本更低、特异性和稳定性强。
