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[发明专利]含CpG基序的核酸序列的制备方法及应用-CN201010522899.5有效
发明人：张金秋;卢宇;邓碧华;徐海;吕芳;侯继波 -专利权人：国家兽用生物制品工程技术研究中心
申请日： 2010-10-28 - 公布日： 2011-02-23 - 主分类号： C12N15/10 文献下载
摘要：所述核酸序列的制备方法为：构建重组质粒pMD18-T-B1、重组质粒pMD18-T-B12、重组质粒pMD18-T-B1、重组质粒pMD18-T-B123、重组质粒pMD18-T-3B、重组质粒pMD18-T-6B、重组质粒pSP-6B；以重组质粒pSP-6B为模板，用3’端硫代修饰的随机序列5’-NpNpNpNpsNpsN-3’为引物，利用滚环扩增方法制备所述含CpG基序的核酸序列。
cpg 核酸序列制备方法应用

[发明专利]一种转化质粒的方法-CN201810324195.3有效
发明人：王永刚;杨光瑞;李渊利;陈吉祥;马建忠 -专利权人：兰州理工大学
申请日： 2018-04-12 - 公布日： 2020-08-18 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种转化质粒的方法，涉及分子生物学领域及基因工程领域。本发明公开的转化质粒的方法，其包括：将目标外源质粒与ygiZ基因敲除的感受态宿主细胞混合。通过将宿主细胞的ygiZ基因敲除，提高转化率，该方法具有转化效率高，对大质粒转化效率高的特点，相对于野生型宿主细胞，ygiZ基因敲除的宿主细胞对质粒pUC19的转化效率增加了2.05倍，对质粒pET‑32a的转化效率增加了2.60倍，对质粒p1304的转化效率增加了1.67倍。该方法极大地提高了质粒转化效率，对分子生物学领域及基因工程领域具有十分重要的意义。
一种转化质粒方法

[发明专利]一种重组质粒pZQ12、合成奇偶数碳链单体共聚mcl-PHA的重组菌及其应用-CN201910002258.8有效
发明人：庄倩倩 -专利权人：齐鲁工业大学
申请日： 2019-01-02 - 公布日： 2020-11-13 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明提供一种重组质粒pZQ12、合成奇偶数碳链单体共聚mcl‑PHA的重组菌及其应用，属于基因工程技术领域。所述重组质粒pZQ12包括cimA基因插入到质粒pACYCDuet‑1的NcoI和BamHI多克隆位点处；leuBCD基因插入到质粒pACYCDuet‑1的BamHI和SacI多克隆位点处；ilvA基因插入到质粒pACYCDuet‑1的SacI和AscI多克隆位点；thrA*BC基因插入到质粒pACYCDuet‑1的AscI多克隆位点处。将重组质粒pZQ12和重组质粒pQQ05转入大肠杆菌LZ09中得到重组菌，以廉价且来源广的葡萄糖为唯一碳源并能合成奇偶数碳链单体共聚的mcl‑PHA。
一种重组质粒 pzq12 合成偶数单体共聚 mcl pha 及其应用

[发明专利]基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法-CN201910282837.2有效
发明人：孙坚;李龚;何玉张;刁晓苑;于泳鑫;刘雅红;廖晓萍 -专利权人：华南农业大学
申请日： 2019-04-10 - 公布日： 2020-07-31 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明共公开了一种基于mariner转座子构建自杀型质粒及耐药突变菌株的方法。该自杀型质粒的构建包括如下步骤：以pCat‑marinerr质粒为模板进行PCR扩增，将获得的扩增产物作为质粒骨架；然后以pUC57‑tpm质粒为模板扩增tpm抗性基因，再将质粒骨架和tpm抗性基因进行同源重组，得到所述自杀型质粒。本发明中的耐药突变菌株是将自杀型质粒转化大肠杆菌WM3064感受态细胞，然后将获得菌株和目标菌株混合培养，再用含有亚碲酸盐的单药板、以及含有亚碲酸盐和原抗性筛选标记药物的双药板进行筛选，得到耐药突变菌株
基于 mariner 座子构建自杀质粒耐药突变菌株方法

[发明专利]利用双质粒系统在蛋白中引入非天然氨基酸-CN201910210100.X有效
发明人：查若鹏;吴松;张振山;刘慧玲;陈卫 -专利权人：宁波鲲鹏生物科技有限公司
申请日： 2019-03-19 - 公布日： 2021-10-01 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明提供了利用双质粒系统在蛋白中引入非天然氨基酸的方法。具体地，本发明提供了一种双质粒系统，所述双质粒系统包括第一质粒和第二质粒，所述第一质粒包含用于表达目的蛋白的第一表达盒，所述第二质粒包含用于表达氨酰基‑tRNA合成酶的第二表达盒；所述系统还含有用于编码人工结果表明本申请的双质粒系统能够将非天然氨基酸直接引入到蛋白中，成本低，产率高，环境污染小。
利用质粒系统蛋白引入天然氨基酸

[发明专利]高通量简化噬菌体基因组骨架的方法-CN202210212383.3有效
发明人：马迎飞;袁盛建 -专利权人：深圳先进技术研究院
申请日： 2022-03-04 - 公布日： 2023-02-21 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：所述方法包括如下步骤：设计并合成噬菌体的CiPGr序列文库，将CiPGr序列文库与pTarget质粒骨架组装，形成CiPGr质粒文库；将CiPGr质粒进行转化后提取CiPGr质粒；将CiPGr质粒转化进入含有spCas9质粒的宿主细菌中，得到CiPGr质粒‑细菌文库；将野生型噬菌体和对应的CiPGr质粒‑细菌文库在培养基中培养，迭代培养，生成突变噬菌体库；对间隔一定转移次数后得到的突变噬菌体库进行测序，确认所述噬菌体中的所有可删除基因
通量简化噬菌体基因组骨架方法

[发明专利]应用HPV18间隔序列构建双顺反子表达质粒的方法-CN202010659734.6有效
发明人：何红鹏;张傲薇;王媛;李伟强;刘浩成;张同存;王楠;罗学刚;马文建;李中媛;宋亚囝;齐威;周飒 -专利权人：天津科技大学
申请日： 2020-07-08 - 公布日： 2023-09-15 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明涉及一种应用HPV18间隔序列构建双顺反子表达质粒的方法，步骤如下：⑴利用PCR方法扩增GFP编码序列；⑵利用PCR方法使pCMV‑Tag2B‑HPV18 E6质粒线性化；⑶利用同源重组法构建重组质粒；⑷转化大肠杆菌DH5α、挑单菌落、提取质粒；⑸后采用PCR验证质粒构建是否成功；⑹重组质粒pCMV‑Tag2B‑HPV18 E6‑GFP测序。本发明利用HPV18 E6和E7间隔序列构建了HPV18 E6和GFP(绿色荧光蛋白)的双顺反子表达质粒，并将此质粒转染哺乳动物细胞HEK293，实现了E6基因和GFP基因的共表达。
应用 hpv18 间隔序列构建顺反子表达质粒方法

[发明专利]一种重复模块基因拼接方法-CN201010139914.8无效
发明人：孟清;李梦梦;施长华 -专利权人：东华大学
申请日： 2010-04-06 - 公布日： 2010-08-18 - 主分类号： C12N15/66 文献下载
摘要：本发明涉及一种重复模块基因拼接方法，包括：(1)利用两条PCR引物对目的基因进行扩增；(2)双酶切PCR产物和质粒pET-LIC，片段与载体相连接，转化感受态细胞后得到质粒pET-TS；(3)双酶切质粒pET-TS并回收质粒片段，然后与目的基因片段进行连接转化，得到质粒pET-TS2；(4)双酶切pET-TS2并回收质粒片段，然后与目的基因片段进行连接转化，得到质粒pET-TS3；(5)双酶切上述质粒及目的基因
一种重复模块基因拼接方法

[发明专利]治疗肿瘤抑制基因p53缺陷肿瘤的重组毒素腺病毒突变体-CN98124026.7无效
发明人：魏于全;田聆 -专利权人：华西医科大学
申请日： 1998-12-25 - 公布日： 2000-07-05 - 主分类号： C12N7/01 文献下载
摘要：主要特点是用质粒pVC45F,质粒pGL3－control,质粒pABS.4,腺病毒质粒pBHG11,质粒pUC18,腺病毒突变体dL1520等经一系列中间过程,得到基因表达质粒等等中间产物,将最后得到的产物质粒pBHG－PE与质粒pAd△E1b转染293细胞,从形成的空斑中筛选出含有重组毒素基因的腺病毒突变体,用PCR鉴定重组毒素腺病毒突变体,命名CBC－015,该重组突变体可进一步开发为一种效率强大的抗肿瘤新药
治疗肿瘤抑制基因 p53 缺陷重组毒素病毒突变体

[发明专利]一种可用于丙酮丁醇梭菌基因中断的重组质粒-CN200710042142.4无效
发明人：杨晨;邵丽君;胡世元;顾阳;陈军;杨蕴刘;姜卫红 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2007-06-18 - 公布日： 2008-12-24 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组质粒及其制备方法和应用，以及利用该重组质粒作为出发质粒制备的两种基因敲除的重组质粒载体pSY6－buk和pSY6－solR，及重组质粒载体pSY6－buk和pSY6－solR制备方法和应用本发明提供的重组质粒可作为丙酮丁醇梭菌基因敲除的出发质粒，能高效，快速地进行基因敲除，可发展成为一种新的遗传操作系统，以改善目前丙酮丁醇梭研究中现有的遗传操作系统的不完善的情况，从而为丙酮丁醇梭菌的代谢工程研究提供便捷，重组质粒载体pSY6－buk和pSY6－solR可直接用于构建丙酮丁醇梭菌buk和solR基因的敲除的菌株。
一种用于丙酮丁醇基因中断重组质粒

[发明专利]硬质粒子和使用了该硬质粒子的烧结滑动构件-CN202010651771.2有效
发明人：鸭雄贵;山田贵之;安藤公彦 -专利权人：丰田自动车株式会社
申请日： 2020-07-08 - 公布日： 2022-10-28 - 主分类号： B22F1/00 文献下载
摘要：本发明涉及硬质粒子和使用了该硬质粒子的烧结滑动构件。目的在于提供耐磨损性提高了的硬质粒子和使用了该硬质粒子的烧结滑动构件。该硬质粒子包含La：1质量％～7质量％、Mo：30质量％～50质量％、Ni：10质量％～30质量％、Mn：10质量％以下、C：1.0质量％以下、余量：不可避免的杂质和Co。
硬质粒子使用烧结滑动构件

[发明专利]一种基于CRISPR/Cas和lambda Red重组系统的体内质粒编辑系统及其应用-CN201910089302.3在审
发明人：孙义成;耿艺漫;严海芹;任改仙;郭晓鹏;钱朝晖;赵振东;金奇 -专利权人：中国医学科学院病原生物学研究所
申请日： 2019-01-30 - 公布日： 2019-05-03 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公布了一种基于CRISPR/Cas和lambda Red重组系统的体内质粒编辑系统及其应用。所述体内质粒编辑系统包括：HsdR功能缺失且基因组中整合有可诱导表达的λRed重组蛋白基因和可诱导表达的Cas蛋白基因的大肠杆菌工程菌株，插入靶标序列的crRNA表达质粒，以及等位交换底物和靶标质粒。本发明将CRISPR‑Cas系统与重组工程整合使用，建立一种快速且无痕的体内质粒编辑方法，可方便快捷地在大肠杆菌中对质粒进行基因删除、点突变和片段插入，以及建立质粒突变库。
体内质粒编辑系统诱导表达靶标整合质粒大肠杆菌工程菌重组蛋白基因大肠杆菌表达质粒蛋白基因功能缺失基因删除片段插入点突变基因组突变库底物无痕应用交换

[发明专利]一种EV71病毒核酸质粒及其构建方法及应用-CN201910832157.3在审
发明人：王长兵;田新贵;游爱萍;刘文宽;周志超;李潇;周荣 -专利权人：广州医科大学附属第一医院
申请日： 2019-09-04 - 公布日： 2020-01-17 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种EV71病毒核酸质粒，其中所述EV71病毒核酸质粒包括EV71病毒全长cDNA序列和真核表达质粒序列。本发明还提供了所述EV71病毒核酸质粒的构建方法，该病毒核酸质粒能够在肿瘤细胞中包装出活体病毒并引发肿瘤细胞的凋亡。本发明还提供了所述EV71病毒核酸质粒用于制备抑制实体瘤药物的用途。本发明的EV71病毒核酸质粒通过运载工具能够进入到肿瘤细胞中包装出活体病毒，引发肿瘤细胞的凋亡，有效提高病毒溶瘤的功能。
核酸质粒肿瘤细胞凋亡活体病毒全长cDNA序列真核表达质粒病毒核酸病毒溶瘤运载工具实体瘤构建质粒制备

[发明专利]一种重组表达质粒、转化子及其应用-CN201611147437.3有效
发明人：庞振华;周豪宏;刘修才 -专利权人：上海凯赛生物技术股份有限公司;CIBT美国公司
申请日： 2016-12-13 - 公布日： 2021-12-07 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组表达质粒，还涉及一种含有重组表达质粒的转化子。一种含有重组表达质粒的转化子，所述转化子的宿主菌为蜂房哈夫尼菌，所述重组表达质粒是温控重组表达质粒，所述温控重组表达质粒包含受热不稳定阻遏蛋白调控的启动子和编码多肽的聚核苷酸，该多肽的表达受所述启动子控制本发明解决了现在重组质粒在连续传代中出现不稳定的问题。
一种重组表达质粒转化及其应用

[发明专利]一种穿梭质粒载体及其构建方法和应用-CN201810853597.2有效
发明人：张小蒙;周敏;季梦玮 -专利权人：江苏医药职业学院
申请日： 2018-07-30 - 公布日： 2021-07-02 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明属于质粒载体构建领域，提供一种穿梭质粒载体及其构建方法和应用。该穿梭质粒载体是由嗜水气单胞菌质粒pBK760与载体pMD20连接构建而成。本发明提供的穿梭质粒载体可在大肠杆菌和嗜水气单胞菌中复制。嗜水气单胞菌中遗传操作体系尚不成熟、转化步骤较繁琐，且其转化效率相对较低，而大肠杆菌中基因克隆操作十分便利。利用该穿梭质粒载体在大肠杆菌中完成外源基因克隆和重组质粒构建，便于开展相关基因功能研究和遗传育种工作。
一种穿梭质粒载体及其构建方法应用