本发明公开一种酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体,其包含如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列、限制性酶切位点Nde Ⅰ和限制性酶切位点BamH Ⅰ。一种如前所述的酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体的构建方法,其包括以下步骤:根据GenBank数据库收录的大鼠酪蛋白激酶Iα的核苷酸序列设计扩增CKIα的引物;获取大鼠细胞的全cDNA;利用所述扩增CKIα的引物从所述cDNA中的克隆CKIα基因;将所述克隆获得的CKIα基因与原核表达载体进行连接,获得重组的原核表达载体。本发明酪蛋白激酶Iα的重组蛋白的原核表达载体及其构建方法成功利用了原核表达系统,获得了重组CKIα。