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[发明专利]抗氯胺酮特异性抗体、质粒载体及方法-CN202111626212.7有效
发明人：徐琴;项美华;陈安琪;刘清泉;吴琼杉;余铭恩 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2021-12-28 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： C07K16/44 文献下载
摘要：本发明用KET‑BSA偶联物免疫小鼠，分离鼠脾脏淋巴细胞并通过流式细胞仪分选出与KET‑BSA偶联物特异性结合的B淋巴细胞，利用单细胞PCR扩增出B淋巴细胞中的抗体重链及轻链可变区序列，将得到的序列构建成完整鼠IgG抗体序列表达载体，通过瞬转HEK293F细胞表达单克隆抗体，纯化单克隆抗体，通过胶体金层析实验筛选出优势单抗，比传统单克隆抗体制备大大缩短了时间，并且得到的单克隆抗体稳定性高，均一性好，大大减小批间差异。
氯胺酮特异性抗体质粒载体方法

[发明专利]一种间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白及其单克隆抗体的制备-CN201911334841.5有效
发明人：胡冉;刘清泉;胡祥叶;吴琼杉;余铭恩 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2019-12-23 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N9/04 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，公开了一种间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白及其单克隆抗体的制备。本发明所述间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。为增强该重组蛋白在原核细胞中的表达效果，本发明运用一段柔性片段(四个甘氨酸)作为连接短肽，将间日疟原虫乳酸脱氢酶蛋白(LDH)抗原的A优势表位和B优势表位序列串联后三次重复，组成一个重组蛋白。本发明还涉及该重组蛋白单克隆抗体的制备，经过免疫、细胞融合及多轮筛选得到单克隆细胞株，纯化单克隆抗体并分别标记荧光微球，正交实验确定最佳单抗配对组合。用该重组抗原免疫制得的单克隆抗体具有高特异性，可用于疟疾感染的早期诊断。
一种间日疟原虫乳酸脱氢酶重组蛋白及其单克隆抗体制备

[发明专利]肌红蛋白单克隆抗体的制备和应用-CN202011500965.9有效
发明人：项美华;李小平;刘清泉;余铭恩;吴琼杉 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2020-12-17 - 公布日： 2022-05-20 - 主分类号： C07K16/18 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域。本发明提供了一种重组蛋白，该重组蛋白氨基酸序列由肌红蛋白(Myoglobin,Myo)两个优势表位重复串联组成，并采用大肠杆菌偏爱密码子将重组蛋白氨基酸序列转换为对应的核苷酸序列，化学合成核苷酸序列并构建重组表达载体，从而提高重组蛋白在大肠杆菌中的表达量。本发明还涉及用该重组蛋白免疫小鼠建立噬菌体库，经淘选筛选得到对应肌红蛋白单链抗体scfv序列，将得到的scfv序列构建成完整鼠IgG1抗体序列表达载体，通过瞬转HEK293F细胞表达单克隆抗体，纯化单克隆抗体，通过免疫荧光正交实验确定最佳单抗配对组合。
肌红蛋白单克隆抗体制备应用

[发明专利]一种犬脑钠肽(BNP)单克隆抗体的制备-CN202011507501.0有效
发明人：武戌青;曹丹琴;陈安琪;余铭恩;吴琼杉 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2020-12-18 - 公布日： 2022-05-20 - 主分类号： C07K16/26 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域。本发明涉及一种包含犬脑钠肽（BNP）两个优势抗原表位的多肽，通过用多肽偶联KLH蛋白免疫小鼠来增强免疫效果。本发明还提供了一种重组蛋白，该重组蛋白包含犬BNP两个优势表位，为提高该重组蛋白在原核表达系统中的产量，采用大肠杆菌偏爱密码子将该重组蛋白氨基酸序列转换为对应核苷酸序列，通过化学合成该核苷酸序列并构建重组蛋白表达载体。本发明还涉及用多肽偶联KLH蛋白免疫小鼠建立噬菌体库，经淘选筛选得到对应犬BNP单链抗体scfv序列，将得到的scfv序列构建成完整鼠IgG1抗体序列表达载体，通过瞬转HEK293F细胞表达单克隆抗体，纯化单克隆抗体，通过免疫荧光正交实验确定最佳单抗配对组合。
一种犬脑钠肽 bnp 单克隆抗体制备

[发明专利]一种犬Ⅱ型腺病毒重组蛋白单克隆抗体的制备-CN202011507484.0有效
发明人：洪淑凡;曹丹琴;余卫;余铭恩;吴琼杉 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2020-12-18 - 公布日： 2022-05-20 - 主分类号： C07K16/08 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域。本发明涉及一种重组蛋白，该重组蛋白包含犬Ⅱ型腺病毒蛋白的两个优势抗原表位，为提高该重组蛋白在原核表达系统中的产量，采用大肠杆菌偏爱密码子将该重组蛋白氨基酸序列转换为对应的核苷酸序列，化学合成该核苷酸序列并构建重组表达载体。本发明还涉及用该重组蛋白免疫小鼠建立噬菌体库，经淘选筛选得到对应犬Ⅱ型腺病毒蛋白单链抗体scfv序列，将得到的scfv序列构建成完整鼠IgG1抗体序列表达载体，通过瞬转HEK293F细胞表达单克隆抗体，纯化单克隆抗体并分别标记铕离子（Eu3+），通过正交实验确定最佳单抗配对组合，可用于犬传染性喉气管炎和肺炎的早期诊断。
一种病毒重组蛋白单克隆抗体制备

[发明专利]轮状病毒重组蛋白特异性抗体、质粒载体及方法-CN202111613315.X在审
发明人：吴静;武戌青;洪淑凡;陈安琪;吴琼杉;余铭恩 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2021-12-27 - 公布日： 2022-04-05 - 主分类号： C07K16/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组蛋白，该重组蛋白氨基酸序列由轮状病毒VP6的两个优势抗原表位串联组成，本发明还涉及用该重组蛋白免疫小鼠，通过流式细胞仪分选出与重组蛋白特异性结合的B淋巴细胞，利用单细胞PCR技术将这些淋巴细胞中的抗体重链及轻链可变区序列扩增出来，并将其构建成完整鼠IgG抗体表达载体，通过瞬转HEK293F细胞表达并纯化单克隆抗体。利用胶体金免疫层析技术及正交实验确定最佳单抗配对组合，对轮状病毒肠胃炎的早期诊断和防治具有重要意义。
轮状病毒重组蛋白特异性抗体质粒载体方法

[发明专利]一种空肠弯曲菌重组蛋白及其单克隆抗体的制备-CN201911334876.9有效
发明人：项美华;朱伟;曹丹琴;武戌青;吴琼杉;余铭恩 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2019-12-23 - 公布日： 2021-09-17 - 主分类号： C07K14/205 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体涉及一种空肠弯曲菌重组蛋白及其单克隆抗体的制备。该重组蛋白是以空肠弯曲菌膜蛋白(LoIA)的A优势表位与B优势表位用一段柔性片段作为连接短肽串联后重复三次形成的，其氨基酸序列为SEQ ID No:1所示。将该重组蛋白通过免疫Balb/c小鼠，细胞融合和多轮细胞筛选后得到单克隆细胞株。制备并纯化单克隆抗体后分别标记荧光微球，正交实验确定最佳单抗配对组合。可用于空肠弯曲菌感染的早期诊断。
一种空肠弯曲重组蛋白及其单克隆抗体制备

[发明专利]一种猫细小病毒重组蛋白及其单克隆抗体的制备-CN201911334829.4有效
发明人：武妮妮;洪淑凡;陈安琪;吴琼杉;余铭恩 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2019-12-23 - 公布日： 2021-07-23 - 主分类号： C07K14/015 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域。本发明涉及一种猫细小病毒重组蛋白，该猫细小病毒重组蛋白包含猫细小病毒(FPV)抗原的两个优势表位，为提高该重组蛋白在原核表达系统中的产量，采用大肠杆菌偏爱密码子将该重组蛋白氨基酸序列转换为对应的核苷酸序列，化学合成该核苷酸序列并构建重组表达载体。本发明还涉及该猫细小病毒重组蛋白单克隆抗体的制备，经过免疫、细胞融合及多轮筛选后得到杂交瘤细胞株，纯化单克隆抗体并分别标记胶体金颗粒，通过正交实验确定最佳单抗配对组合，可用于猫细小病毒感染的早期诊断。
一种细小病毒重组蛋白及其单克隆抗体制备

[发明专利]一种重组犬C反应蛋白及其单克隆抗体的制备-CN201711343332.X有效
发明人：胡祥叶;余铭恩;项美华;朱伟;王璐;刘清泉;吴琼杉;曹丹琴;武戌青;王立童 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2017-12-14 - 公布日： 2021-03-26 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域。本发明提供了一种多肽，该多肽包含犬C反应蛋白(CRP)两个优势抗原表位，为增强其免疫效果，将该多肽偶联KLH蛋白。本发明提供了一种犬CRP重组蛋白，该重组蛋白主要包含犬CRP两个优势抗原表位。为提高该重组蛋白在原核表达系统中的产量，采用大肠杆菌偏爱密码子将该重组蛋白氨基酸序列转换为对应核苷酸序列，通过化学合成该核苷酸序列并构建重组蛋白表达载体。本发明还涉及该重组蛋白单克隆抗体的制备，经过抗原免疫、细胞融合及多轮筛选后得到单克隆细胞株，纯化单克隆抗体并分别标记荧光微球，通过正交实验确定最佳单抗配对组合，可用于炎症诊断。
一种重组反应蛋白及其单克隆抗体制备

[发明专利]猫疱疹I型病毒快速检测的制备方法-CN201811386302.1有效
发明人：刘清泉;胡祥叶;朱伟;项美华;武戌青;王立童;吴琼杉;余铭恩 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2018-11-20 - 公布日： 2020-12-08 - 主分类号： C12N15/38 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，通过对猫疱疹I型病毒抗原序列进行分析，选择其中一段优势抗原表位序列，为增加其在原核细胞中的表达效果，将该序列进行重复，并采用大肠杆菌最嗜密码子合成对应的核苷酸序列。采用基因工程方法将上述核苷酸序列插入原核表达载体并构建重组表达菌株，该表达菌株通过IPTG诱导后产生重组蛋白FHV51，最终基于该重组蛋白建立猫疱疹I型病毒胶体金诊断方法。本发明主要涉及猫疱疹I型病毒重组抗原的制备、该重组抗原多抗的制备及基于该重组蛋白建立的一种猫疱疹I型病毒急性感染与潜伏期感染的快速诊断方法。
疱疹病毒快速检测制备方法

[发明专利]一种重组G-17蛋白及其单克隆抗体的制备-CN201811384893.9在审
发明人：刘清泉;胡祥叶;朱伟;项美华;武戌青;王立童;吴琼杉;余铭恩 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2018-11-20 - 公布日： 2019-05-17 - 主分类号： C07K14/595 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域。本发明提供了一种重组蛋白，该重组蛋白包含胃泌素‑17(以下称G‑17)全部抗原表位，并将全部抗原表位序列通过柔性片段(连续四个甘氨酸)连接后重复十次，形成重组G‑17蛋白氨基酸序列。为提高该重组蛋白在原核表达系统中的产量，采用大肠杆菌偏爱密码子将该重组蛋白氨基酸序列转换为对应核苷酸序列，通过化学合成该核苷酸序列并构建重组蛋白表达载体。本发明还涉及该重组蛋白单克隆抗体的制备，经过抗原免疫、细胞融合及多轮筛选后得到单克隆细胞株。纯化的单克隆抗体经过蛋白分子相互作用仪筛选出优势抗体配对，分别标记荧光微球和包被NC膜，通过实验确定最佳单抗配对组合，可用于G‑17的定量检测。
重组蛋白单克隆抗体核苷酸序列抗原表位配对制备大肠杆菌偏爱密码子蛋白氨基酸序列筛选单克隆细胞株生物技术领域原核表达系统重组蛋白表达氨基酸序列标记荧光蛋白分子定量检测化学合成抗原免疫柔性片段细胞融合甘氨酸胃泌素包被单抗多轮构建抗体可用微球蛋白重复转换

[发明专利]猫血清淀粉样蛋白A及其单克隆抗体的制备方法和应用-CN201811384920.2在审
发明人：刘清泉;胡祥叶;朱伟;项美华;武戌青;王立童;吴琼杉;余铭恩 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2018-11-20 - 公布日： 2019-03-26 - 主分类号： C07K14/47 文献下载
摘要：本发明属于生物工程技术领域，本发明涉及一种重组蛋白，该重组蛋白包含猫血清淀粉样蛋白A的两个优势抗原表位，为提高该重组蛋白在原核表达系统中的产量，采用大肠杆菌偏爱密码子将该重组蛋白氨基酸序列转换为对应的核苷酸序列，化学合成该核苷酸序列并构建重组表达载体。本发明还涉及该重组蛋白单克隆抗体的制备，经过免疫、细胞融合及多轮筛选后得到杂交瘤细胞株，纯化单克隆抗体并分别标记铕离子(Eu3+)，通过正交实验确定最佳单抗配对组合，可用于猫感染性炎症的早期诊断。
重组蛋白血清淀粉样蛋白A 单克隆抗体核苷酸序列大肠杆菌偏爱密码子生物工程技术领域纯化单克隆抗体制备方法和应用优势抗原表位原核表达系统杂交瘤细胞株重组表达载体氨基酸序列感染性炎症化学合成细胞融合早期诊断铕离子单抗多轮构建可用正交配对制备筛选转换

[发明专利]一种伤寒杆菌重组蛋白及其单克隆抗体的制备-CN201811384880.1在审
发明人：刘清泉;胡祥叶;朱伟;项美华;武戌青;王立童;吴琼杉;余铭恩 -专利权人：杭州贤至生物科技有限公司
申请日： 2018-11-20 - 公布日： 2019-03-26 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，公开了一种伤寒杆菌重组蛋白及其单克隆抗体的制备。本发明所述伤寒杆菌重组蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID No:1所示。为增强该重组蛋白在原核细胞中的表达效果，本发明运用一段柔性片段(四个甘氨酸)作为连接短肽，将伤寒杆菌鞭毛(H)抗原的A优势表位和B优势表位序列串联后三次重复，组成一个重组蛋白。本发明还涉及该重组蛋白单克隆抗体的制备，经过免疫、细胞融合及多轮筛选得到单克隆细胞株，纯化单克隆抗体并分别标记荧光微球，正交实验确定最佳单抗配对组合。用该重组抗原免疫制得的单克隆抗体具有高特异性，可用于伤寒杆菌感染的早期诊断。
重组蛋白单克隆抗体伤寒杆菌制备优势表位纯化单克隆抗体单克隆细胞株伤寒杆菌感染生物技术领域氨基酸序列标记荧光连接短肽柔性片段细胞融合原核细胞早期诊断重组抗原甘氨酸抗原鞭毛单抗多轮可用微球正交配对串联筛选重复

[发明专利]生物仪器管路清洗液及制备方法-CN201510949070.6有效
发明人：王国涛;詹海燕;余铭恩;吴琼杉;王璐;朱伟;项美华 -专利权人：杭州毕肯莱博生物科技有限公司
申请日： 2015-12-18 - 公布日： 2019-01-29 - 主分类号： C11D7/60 文献下载
摘要：本发明涉及一种能溶解并清除管路内壁所附着蛋白分子的生物仪器管路清洗液及制备方法，质量百分比：三羟甲基氨基甲烷（Tris）作为成分Ⅰ占0.5%～1%，β‑环糊精作为成分Ⅱ占0.2%～0.5%，ε‑多聚赖氨酸作为成分Ⅲ占0.2%～0.5%，脱氧胆酸钠作为成分Ⅳ占0.5%~1%，纯化水为溶剂作为成分Ⅴ占97%～98.6%。优点：一是对塑料、陶瓷、金属、玻璃管路中的蛋白残留清洗效果明显，清洗后，管路内表面不挂水珠，无液体残留，不会对后续的管路使用造成影响；二是对塑料、陶瓷、金属、玻璃管路无腐蚀性，克服了通过酸碱清洗等传统方法对管路内壁的损伤；三是本清洗液使用安全，对人体表无伤害，不存在操作风险；四是本清洗液并不局限于对各种材质管路内部的清洗，也可用于各种硬质表面的清洗。
生物仪器管路清洗制备方法

[发明专利]一种犬松弛素重组蛋白及其单克隆抗体的制备-CN201810857284.4在审
发明人：胡祥叶;吴琼杉;曹丹琴;王立童;衣铭;杨鹏英;项美华;刘清泉 -专利权人：杭州艾宠科技有限公司
申请日： 2018-07-31 - 公布日： 2018-11-16 - 主分类号： C07K14/64 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域。本发明提供了一种犬松弛素重组蛋白，该重组蛋白主要包含犬松弛素两个优势抗原表位。为提高该重组蛋白在原核表达系统中的产量，采用大肠杆菌偏爱密码子将该重组蛋白氨基酸序列转换为对应的核苷酸序列，通过化学合成该核苷酸序列并构建重组表达载体。本发明还涉及该重组蛋白单克隆抗体的制备，经过抗原免疫、细胞融合及多轮筛选后得到单克隆细胞株，纯化单克隆抗体并分别标记胶体金颗粒，通过正交实验确定最佳单抗配对组合，可用于犬妊娠诊断。
重组蛋白松弛单克隆抗体核苷酸序列制备种犬大肠杆菌偏爱密码子纯化单克隆抗体单克隆细胞株生物技术领域优势抗原表位原核表达系统重组表达载体氨基酸序列标记胶体化学合成抗原免疫妊娠诊断细胞融合金颗粒单抗多轮构建可用正交配对筛选转换

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