一种使用定量测定PCR检测具有线粒体DNA3243变异的DNA的方法,所述PCR使用具有与从SEQ ID NO:1碱基序列中第243位碱基开始并且长12到30个碱基的碱基序列互补的碱基序列的引物。此外,提供了一种检测具有线粒体DNA 3243变异的DNA的方法,其中使用末端用荧光染料标记的核酸探针,其中杂交后荧光染料的荧光减少,所述核酸探针具有与从SEQ ID NO:2碱基序列中第230位碱基开始并且长14到40个碱基的碱基序列互补的碱基序列,且所述核酸探针的3’端用荧光染料标记。
所述引物为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2的序列;所述探针为SEQ ID NO:4的序列,其5’端单链碱基序列,其为与靶序列互补的5-10个碱基;中间13-20个碱基;3’端序列,为5-10个碱基序列;所述5’端单链碱基序列与3’端序列部分匹配成颈结构;所述探针为颈环结构,TM值=(颈环TM值+7)±1,5’端有18-25个碱基能够和靶基因完全匹配,共约23-32bp;其5’端和3’端分别标记荧光和非荧光淬灭基团
NO:3和SEQ ID NO:4组成的一对引物对同一只鸡的总DNA进行PCR扩增,得到SEQ ID NO:6;对所述SEQ ID NO:6进行单链构象多态性检测后测序,确定自SEQ ID NO:6的5′端第32位碱基是G还是C,自5′端第281位碱基是T还是C;单链构象多态性检测为一条带,且自SEQ ID NO:6的5′端第32位碱基为G,第281位碱基为T的是CC基因型的鸡;单链构象多态性检测为一条带,且自SEQ ID NO:6的5′端第32位碱基为C,第281位碱基为C的是DD基因型的鸡;单链构象多态性检测为二条带,且其中的一条带自SEQ IDNO:6的5′端第32位碱基为G,第281位碱基为T,另一条带自SEQ ID NO:6的5′端第32位碱基为C,第281位碱基为C的是CD基因型的鸡;脂肪沉积的能力由强到弱依次为CC,CD,DD基因型的鸡。