本发明公开了一种人类KIR基因分型检测引物组,包括SEQ ID No.1‑32所示的引物16对引物;本发明基于聚合酶链式反应(荧光PCR)反应原理,引物3'末端的第一个碱基与等位基因特异性碱基互补,特异性引物对仅扩增与其相匹配的等位基因;引物设计依据美国国家生物技术信息中心(NCBI)建立的DNA序列数据库(Genbank)中的血型抗原基因突变数据库(dbRBC)公开的人类基因序列,选择适合的特异性突变点设计引物;PCR掺入染料法以荧光染料通过掺入DNA的扩增产物来表示DNA扩增的效果。在扩增后进行熔解曲线分析。通过熔解曲线分析能确认目的产物是否被特异性扩增,以此来判断等位基因。
本发明与环介导等温扩增反应有关。步骤是:(1)引物设计:根据人α-乳清蛋白基因序列设计特异引物,该引物的序列如SEQ ID NO:1-4所示。(2)建立环介导等温扩增反应方法,即以FIP、BIP为内引物,F3、B3为外引物对人α-乳清蛋白基因进行恒温扩增,得特异扩增片段。(3)对环介导恒温扩增产物进行分析:采用琼脂糖凝胶电泳和荧光染料染色对扩增产物进行分析,根据凝胶成像观察是否出现梯形条带,判定是否含有转基因成分;或在日光下肉眼观察将环介导等温扩增产物的结果。本发明简便,快速,特异性强,且成本较低,适合基层应用。