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[发明专利]制备无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒的方法-CN201610529226.X有效
发明人：熊思东;齐兴梅 -专利权人：苏州大学
申请日： 2016-07-07 - 公布日： 2019-12-13 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明涉及一种制备无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒的方法，包括以下步骤：将自发断裂蛋白质内含子的C端与目的蛋白基因融合，N端与增强目的蛋白表达的标签蛋白融合，得到融合蛋白编码基因；将融合蛋白编码基因在大肠杆菌中诱导表达，通过自发断裂蛋白质内含子的C端自发断裂，释放所述目的蛋白，形成包涵体蛋白；将大肠杆菌细胞破碎，离心，弃掉上清液，得到无融合标签包涵体蛋白纳米颗粒。本发明解决了在包涵体蛋白颗粒水平上实现标签蛋白的移除，填补了制备无标签包涵体蛋白纳米颗粒的技术空白，并且蛋白质内含子的自发断裂在大肠杆菌体内完成，后处理简单。
制备融合标签包涵蛋白纳米颗粒方法

[发明专利]新型材料BEM的制备及应用方法-CN201910855146.7在审
发明人：韩烨;赵芳坤;肖华志;周志江 -专利权人：天津大学
申请日： 2019-09-10 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N9/26 文献下载
摘要：本发明公开了一种新型材料BEM的制备及应用方法，它涉及一种利用包涵体制备纯化固定化材料的方法，利用HCl或三氯乙酸(TCA)煮沸大肠杆菌重组表达得到的包涵体，得到BEM(细菌增强基质，主要组分是细胞壁)该方法能够将无用的包涵体制备成为纯化固定化材料用于纯化固定化带有AcmA标签的重组蛋白。该方法可以将包涵体制备成纯化固定化材料BEM并且可以替代GEM作为纯化固定化材料。
固定化材料重组蛋白固定化细胞壁标签大肠杆菌重组三氯乙酸新型材料煮沸包涵体基质制备细菌替代应用

[发明专利]一种包涵体蛋白稀释透析复性的方法-CN201910237696.2有效
发明人：雍金贵;张伦 -专利权人：安徽环球基因科技有限公司
申请日： 2019-03-27 - 公布日： 2021-04-06 - 主分类号： C07K1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种包涵体蛋白稀释透析复性的方法，采用温和的变性方法溶解包涵体蛋白，保护包涵体蛋白中原有的二级结构不被破坏将大大有利于包涵体蛋白的复性；该方法集合了稀释及透析进行蛋白复性的方法，第一次稀释降低变性剂浓度
一种包涵蛋白稀释透析复性方法

[发明专利]一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法-CN201310218483.8无效
发明人：王朋;赵林萍;鲁龙;李慧英;任宝红;王军;苗银萍;王真;孙帅领;张如民;曾小宇 -专利权人：郑州中道生物技术有限公司
申请日： 2013-06-04 - 公布日： 2013-09-04 - 主分类号： C07K14/24 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌表达包涵体蛋白纯化复性方法，将表达包涵体蛋白的菌株离心收集，洗涤后，用BufferA进行重悬，接着用超声波或液压破碎仪破碎至清亮，经过适当离心后获得包涵体蛋白，用适当浓度的SKL本发明方法操作简单，提高了包涵体复性效率，简化了复性步骤，节约了时间并减少了操作人员的工作量，所得蛋白质纯度较高并且具有生物学活性。
一种大肠杆菌表达包涵蛋白纯化复性方法

[发明专利]一种烟草蚀纹病毒蛋白酶活性包涵体及其制备方法与应用-CN201610300134.4在审
发明人：孙怀昌;李光亚;卢会鹏;肖真真;李洋洋;周晓慧;谭笑;张鑫宇;夏晓莉 -专利权人：扬州大学
申请日： 2016-05-09 - 公布日： 2016-08-24 - 主分类号： C12N9/50 文献下载
摘要：本发明属于生物技术研究领域，具体涉及一种烟草蚀纹病毒蛋白酶(TEVP)活性包涵体及其制备方法和在重组蛋白制备中的应用。所述TEVP活性包涵体由两个PT连接头分隔的ELK16自聚肽和烟草蚀纹病毒蛋白酶组成。其制备方法包括表达载体构建、活性包涵体表达与纯化、重组蛋白切割和目的蛋白回收。与现有的TEVP相比，本发明的TEVP活性包涵体具有制备简单、容易从终产物中去除和价格低廉等优点，可以用于各种重组蛋白的制备。
一种烟草病毒蛋白酶活性包涵及其制备方法应用

[发明专利]复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体及其复性生产舍雷肽酶的方法-CN201911237880.3在审
发明人：陈豪;田健;张东风;诸辉 -专利权人：宁波希诺亚海洋生物科技有限公司
申请日： 2019-12-06 - 公布日： 2020-03-17 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明提供了复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体，编码该多肽包涵体的基因序列如SEQ ID NO：3所示，或者基因序列为SEQ ID NO：3所示的序列经消除、添加、取代一个或多个碱基后能够编码复性后具有舍雷肽酶活性的多肽包涵体的基因序列制备方法为采用来源于沙雷氏菌的舍雷肽酶基因，构建重组质粒并将其转化至宿主细胞中进行表达，然后筛选出高效表达转化子，经乳糖、异丙基硫代半乳糖苷或其他乳糖类似物诱导产生多肽包涵体。本发明通过基因工程技术将目的基因克隆至载体中构建表达载体，并将表达载体导入宿主细胞中，经过培养和诱导表达，重组菌株能够表达出复性后具有高舍雷肽酶活性的多肽包涵体。
复性具有肽酶活性多肽包涵及其生产方法

[发明专利]一种过氧化氢酶活性包涵体与应用-CN202111081250.9在审
发明人：王从纲;庞焦;孙佳明;李明玉;高向红;李宪臻 -专利权人：李宪臻
申请日： 2021-09-15 - 公布日： 2021-12-14 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种过氧化氢酶活性包涵体与应用，属于生物技术领域。所述过氧化氢酶活性包涵体的制备方法包括：(1)构建含有KatA‑linker‑TdoT融合蛋白的编码基因的重组表达载体，将该重组表达载体转入表达宿主细胞，获得重组工程菌；(2)培养所述重组工程菌，诱导外源重组蛋白表达；(3)收集菌体细胞并进行细胞破碎，分离细胞破碎上清液和含有包涵体的沉淀样品，将沉淀样品通过缓冲液洗涤法纯化得到活性包涵体。通过该方法制备得到过氧化氢酶活性包涵体表达量大、易分离纯化、可重复利用、环保安全，有利于促进生物酶催化法在工业中去除残留过氧化氢中的应用。
一种过氧化氢酶活性包涵应用

[发明专利]包涵体蛋白复性并同时纯化的方法-CN01141501.0有效
发明人：苏志国;李明 -专利权人：中国科学院过程工程研究所
申请日： 2001-09-27 - 公布日： 2003-04-16 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明涉及的包涵体蛋白复性并同时纯化的方法，为将溶解的包涵体蛋白在离子交换层析柱中进行变性剂浓度的梯度洗脱或pH值梯度洗脱或同时进行变性剂浓度梯度洗脱和pH值梯度洗脱；其具体步骤是1)用酸性/碱性流动相I或者其它溶液溶解的包涵体蛋白，进入到流动相I平衡的离子交换层析柱中，包涵体蛋白可逆地被吸附在层析介质上；2)然后用碱性/酸性流动相II梯度取代流动相I进行梯度长度为1－5柱体积，流动相II中的变性剂的浓度低于流动相I中的变性剂的浓度，其蛋白可获得高浓度下的高活性回收，同时此过程对不纯的包涵体蛋白有纯化作用。
包涵蛋白复性同时纯化方法

[发明专利]大肠杆菌重组外膜蛋白A包涵体蛋白的复性纯化方法-CN202010854423.5有效
发明人：崔玉东;肖雪 -专利权人：黑龙江八一农垦大学
申请日： 2020-08-24 - 公布日： 2023-05-26 - 主分类号： C07K14/245 文献下载
摘要：本发明涉及一种大肠杆菌重组外膜蛋白A包涵体蛋白的复性纯化方法，该方法包括以下步骤：(1)诱导表达的rOmpA包涵体蛋白沉淀的收集；(2)rOmpA包涵体蛋白用8M尿素溶液变性；(3)用含15mMβ‑环糊精本发明对表达的rOmpA包涵体蛋白进行复性和纯化，可获得纯度高达95％的可溶性rOmpA蛋白；本发明使用的复性方法简便快捷，有效解决了大肠杆菌rOmpA包涵体蛋白的复性纯化问题，为大规模生产利用rOmpA
大肠杆菌重组膜蛋白包涵蛋白复性纯化方法

[发明专利]一种重组人脑利钠肽包涵体高效率复性方法-CN201811549439.4在审
发明人：任东升;刘银花;张艳;何晨 -专利权人：西藏诺迪康药业股份有限公司
申请日： 2018-12-18 - 公布日： 2019-03-01 - 主分类号： C07K14/58 文献下载
摘要：本发明提供了一种重组人脑利钠肽包涵体蛋白复性方法，它包括如下步骤：(1)洗涤包涵体：取重组人脑利钠肽的原核表达包涵体，加入含2mol/L尿素的缓冲液洗涤；(2)溶解包涵体：加入溶解缓冲液，搅拌4小时，离心
人脑利钠肽包涵体上清液复性包涵体蛋白复性复性缓冲液缓冲液洗涤溶解缓冲液复性效率原核表达高效率尿素制备洗涤溶解应用

[发明专利]一种肿瘤血管阻断剂融合蛋白的纯化方法-CN201710647036.2有效
发明人：史权威;潘向辉;李延虎;杨子义 -专利权人：北京华安科创生物技术有限公司
申请日： 2017-08-01 - 公布日： 2021-05-14 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供一种肿瘤血管阻断剂融合蛋白的纯化方法，本发明方法是将大肠杆菌表达的、以包涵体形式存在的肿瘤血管阻断剂融合蛋白的发酵菌体通过高压均质机破碎、高速离心，得到粗制包涵体。用不同洗涤溶液洗涤，得到较净的包涵体，然后经过8M尿素变性溶解包涵体，离心取上清，再用透析法复性。
一种肿瘤血管阻断剂融合蛋白纯化方法

[发明专利]一种碱性果胶酶活性包涵体的制备及其应用-CN201611222644.0有效
发明人：刘松;陈坚;堵国成;赵伟欣;黎青华 -专利权人：江南大学
申请日： 2016-12-27 - 公布日： 2019-10-08 - 主分类号： C12N9/88 文献下载
摘要：本发明公开了一种碱性果胶酶活性包涵体的制备及其应用，属于酶工程领域。本发明提供了一种碱性果胶酶突变体、表达该突变体的基因工程菌及应用该基因工程菌生产碱性果胶酶活性包涵体的方法。应用该方法制备的活性包涵体的酶活可达36.87±3.51U/mL，与对照相比提高了26倍。该碱性果胶酶活性包涵体易于分离及重复利用，性质稳定，在在60℃下保温50min后仍然具有70％以上的的酶活，具有重要的工业价值。
碱性果胶酶包涵体制备基因工程菌突变体应用酶活性质稳定重复利用酶工程保温生产

[发明专利]一种人干扰素-κ的生产方法-CN202011560300.7有效
发明人：彭继先;于海勤;刘翠英;吴桂苹;孟中英;黄明华;韩景花 -专利权人：山东睿鹰制药集团有限公司
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2022-07-12 - 主分类号： C12N15/20 文献下载
摘要：所述包括：构建大肠杆基因工程菌株、培养、收集菌体、离心破碎收集包涵体、包涵体变性、复性和纯化，其中大肠杆基因工程菌株含有密码子优化的IFN‑κ的核苷酸序列。本发明的方法实现了在全水相条件下的包涵体纯化和目标蛋白复性折叠，复性效果好，折叠正确率高，适合工业化生产。
一种干扰素生产方法

[发明专利]融合抗菌肽及其应用-CN201610120163.2在审
发明人：陈龙彪;郑鸣;赵圣振;秦伟峰 -专利权人：河南欧普生物科技有限公司
申请日： 2016-03-03 - 公布日： 2016-06-22 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明属于生物制剂技术领域，尤其涉及一种融合抗菌肽及其应用，其生产步骤包括：步骤1）克隆载体的构建、步骤2）表达载体的构建、步骤3）3Pocec包涵体蛋白的表达、步骤4）3Pocec包涵体蛋白的纯化、步骤5）3Pocec包涵体蛋白的溶解、步骤6)3Pocec包涵体蛋白的切割和步骤7）抗菌肽单体的纯化，本融合抗菌肽经过化学切割后获得两种抗菌肽的单体又分别对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的抑制有很强的抑制作用，
融合抗菌及其应用

[发明专利]一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法及试剂-CN201410363398.5有效
发明人：邹潮 -专利权人：哈德逊(天津)生物技术有限责任公司
申请日： 2014-07-28 - 公布日： 2018-08-03 - 主分类号： C07K14/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种从包涵体中制备可溶性白介素重组蛋白的方法及试剂，包括洗涤液、菌体裂解液、包涵体溶解液、蛋白复性液‑I和蛋白复性液‑II。使用本发明诉述的包涵体溶解液可以显著提高从包涵体中获得可溶性白介素重组蛋白的得率，从而解决用大肠杆菌表达体系生产白介素所存在的问题。
一种包涵制备可溶性白介素重组蛋白方法试剂