[发明专利]IL-6重组单克隆抗体及其制备方法和应用在审
| 申请号： | 201911111871.X | 申请日： | 2019-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN110655576A | 公开（公告）日： | 2020-01-07 |
| 发明（设计）人： | 郑雪松;华权高;沈鹤霄;罗绍祥;陈莹;谭华菊;舒芹 | 申请（专利权）人： | 武汉华美生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/24 | 分类号： | C07K16/24;C12N15/70;G01N33/68;G01N33/577 |
| 代理公司： | 11570 北京众达德权知识产权代理有限公司 | 代理人： | 刘杰 |
| 地址： | 430206 湖北省武汉市东*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种IL‑6重组单克隆抗体的制备方法，其包括如下步骤：以IL‑6免疫小鼠，免疫完成后取小鼠的脾脏，制成单细胞悬液；通过流式细胞仪筛选出记忆B细胞及浆细胞；对所得细胞进行分别培养，再将所得培养物上清液加入到包被IL‑6的培养装置继续培养，检测出分泌特异性抗体的细胞株，筛选出可以特异性识别抗原蛋白的抗体克隆；对所得细胞株进行总RNA的抽提，并反转录成cDNA，扩增抗体重链和轻链的可变区，分别连接至载体；然后进行细胞转染，生产IL‑6重组单克隆抗体。本发明可以通过一次筛选获得大量的抗体序列，可以获得抗体的基因信息，解决了杂交瘤技术中的细胞融合率低以及抗体基因丢失的问题。 | ||
| 搜索关键词： | 重组单克隆抗体 细胞株 分泌特异性抗体 筛选 培养物上清液 单细胞悬液 流式细胞仪 特异性识别 杂交瘤技术 记忆B细胞 基因信息 抗体基因 抗体克隆 抗体序列 抗体重链 抗原蛋白 免疫小鼠 培养装置 细胞融合 细胞转染 一次筛选 反转录 浆细胞 可变区 脾脏 总RNA 包被 抽提 抗体 扩增 轻链 小鼠 制备 细胞 检测 生产 | ||
【主权项】：
1.一种IL-6重组单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：/n(1)、以IL-6免疫小鼠，免疫完成后取小鼠的脾脏，制成单细胞悬液；/n(2)、通过流式细胞仪筛选出记忆B细胞及浆细胞；/n(3)、对步骤(2)所得细胞进行分别培养，再将所得培养物上清液加入到包被IL-6的培养装置继续培养，检测出分泌特异性抗体的细胞株，筛选出可以特异性识别抗原蛋白的抗体克隆；/n(4)、对步骤(3)筛选出的细胞株进行总RNA的抽提，并反转录成cDNA，扩增抗体重链和轻链的可变区，分别连接至载体；然后进行细胞转染，生产IL-6重组单克隆抗体。/n
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