本发明公开了靶向MSLN和4‑1BB的双特异性抗体及其应用。本发明所提供的靶双特异性抗体含有MSLN抗原结合结构域(即纳米抗体可变区，CDR1、CDR2和CDR3依次如SEQ ID No.5第484‑491位、第509‑515位和第554‑565位所示)和4‑1BB抗原结合结构域(重链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次如SEQ ID No.5第31‑35位、第50‑65位和第98‑106位所示；轻链可变区中的CDR1、CDR2和CDR3依次如SEQ ID No.7第24‑34位、第50‑56位和第89‑97位所示)。本发明所提供的双特异性抗体具有良好的T细胞激活效应，并且在此基础上表现出良好的体外肿瘤细胞杀伤效果和体内肿瘤抑制效应，因此，本发明所提供的双特异性抗体用于制备抗体靶向药物具有重要意义和应用潜力。
本发明公开了靶向PD‑L1和4‑1BB的双特异性抗体。本发明双特异性抗体含有PD‑L1抗原结合结构域(HCDR1、HCDR2和HCDR3依次如SEQ ID No.1的第26‑32位、第52‑56位和第98‑107位，LCDR1、LCDR2和LCDR3依次如SEQ ID No.2的第24‑36位、第52‑58位和第93‑100位)和4‑1BB抗原结合结构域(HCDR1、HCDR2和HCDR3依次如SEQ ID No.3的第31‑35位、第50‑65位和第98‑106位，LCDR1、LCDR2和LCDR3依次如SEQ ID No.4的第24‑34位、第50‑56位和第89‑97位)。本发明双特异性抗体稳定性好、安全性高，既能阻断PD‑1与PD‑L1的结合，又能激活人4‑1BB信号通路，能刺激T细胞活化，其能够运用于免疫增强物，或T细胞介导的自身免疫疾病的免疫调节物。
本发明公开了一种与抗4‑1BB抗体结合的抗原表位肽及其抗原抗体复合物晶体。本发明提供了4‑1BB抗原表位肽，为氨基酸序列如SEQ ID No.1的第39‑65位所示的多肽；或者，在此基础上，除了SEQ ID No.1的第40位、第49位、第58位、第60位、第61位、第62位、第63位和第64位外，其他位点进行一个或多个氨基酸残基的保守替换后得到的具有相同功能的多肽。本发明发现了新的4‑1BB抗原表位肽，对于后续相关抗体的制备，以及4‑1BB表达异常相关疾病的诊断、防治均具有重要意义。
