[发明专利]一种抗AMH特异性抗体的制备方法以及该抗体在检测AMH试剂盒中的应用在审

专利信息
申请号: 201910444452.1 申请日: 2019-05-27
公开(公告)号: CN110218252A 公开(公告)日: 2019-09-10
发明(设计)人: 代春迎;侯鹏云;胡晓彤;张跃峰;张创;赵巧辉;李桂林;付光宇;吴学炜;杨增利 申请(专利权)人: 郑州伊美诺生物技术有限公司
主分类号: C07K16/26 分类号: C07K16/26;G01N33/74;G01N33/577
代理公司: 郑州异开专利事务所(普通合伙) 41114 代理人: 王霞
地址: 450016 河南省郑州市*** 国省代码: 河南;41
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摘要: 发明公开了一种抗AMH特异性抗体的制备方法,首先构建包含AMH编码序列的pCMV3表达质粒,转染CHO细胞,收集细胞培养上清,通过Ni柱纯化得到纯化后的AMH重组蛋白备用;用制备的AMH重组蛋白作为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫,ELISA间接法检测小鼠血清效价超过1/8K后,取免疫小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合,杂交瘤细胞通过ELISA间接法进行3次亚克隆筛选,得到分泌抗AMH的单克隆杂交瘤细胞;将杂交瘤细胞注射小鼠腹腔,收集腹水经过纯化后得到抗AMH的特异性单克隆抗体。本发明制备方法简单,制备得到的抗体特异性强,应用在检测人AMH含量的试剂盒中,检测结果几乎不受动物血清的影响,可为医生的临床诊断和治疗提供可靠的依据。
搜索关键词: 制备 特异性抗体 杂交瘤细胞 重组蛋白 间接法 试剂盒 检测 细胞培养 单克隆杂交瘤细胞 特异性单克隆抗体 临床诊断和治疗 小鼠骨髓瘤细胞 免疫小鼠脾脏 抗体特异性 编码序列 表达质粒 次亚克隆 动物血清 检测结果 小鼠血清 注射小鼠 柱纯化 腹水 腹腔 构建 抗体 效价 转染 分泌 备用 应用 筛选 融合 医生
【主权项】:
1.一种抗AMH特异性抗体的制备方法,其特征在于:包括下述步骤:第一步,制备AMH重组蛋白构建包含AMH编码序列的pCMV3表达质粒,转染CHO细胞,收集细胞培养上清,通过Ni柱纯化得到纯化后的AMH重组蛋白备用;第二步,制备抗AMH特异性抗体用第一步制备的AMH重组蛋白作为免疫原对Balb/c小鼠进行免疫,ELISA间接法检测小鼠血清效价超过1/8K后,取免疫小鼠脾脏与小鼠骨髓瘤细胞NS1融合,杂交瘤细胞通过ELISA间接法进行3次亚克隆筛选,得到分泌抗AMH的单克隆杂交瘤细胞;将杂交瘤细胞注射小鼠腹腔,收集腹水经过纯化后得到抗AMH的特异性单克隆抗体。
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