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[发明专利]一种表达胆绿素还原酶的基因重组酵母及其在生物合成胆红素中的应用-CN202310766637.0在审
发明人：梅建凤;陈乐生;庄仕航;应国清;易喻 -专利权人：浙江工业大学;上海和不同科技有限公司
申请日： 2023-06-27 - 公布日： 2023-09-22 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达胆绿素还原酶的基因重组酵母及其在生物合成胆红素中的应用，所述基因重组酵母以毕赤酵母为宿主菌过表达集胞藻来源的胆绿素还原酶，所述胆绿素还原酶编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明以基因重组酵母的菌体作为生物催化剂，在柠檬酸钠缓冲体系中，加入氯化胆绿素为底物，经过转化反应后，生成的胆红素富集在菌体中。菌体作为胆红素提取的原料，干菌体中胆红素的含量可达0.537％。本发明解决了目前只能从动物胆汁中提取生产胆红素难题，具有较高的生产效率，对提高目前胆红素的产能具有显著效果。
一种表达胆绿素还原酶基因重组酵母及其生物合成胆红素中的应用

[发明专利]一种重组酵母基因工程菌及其在生物合成胆绿素中的应用-CN202310615099.5在审
发明人：梅建凤;庄仕航;陈乐生;应国清;易喻 -专利权人：浙江工业大学;上海和不同科技有限公司
申请日： 2023-05-29 - 公布日： 2023-09-01 - 主分类号： C12N1/19 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组酵母基因工程菌及其在生物合成胆绿素中的应用，所述重组酵母基因工程菌以毕赤酵母为宿主菌过表达拟南芥(Arabidopsis thaliana)来源血红素加氧酶1(HO1)。本发明构建表达HO1基因重组毕赤酵母GS115‑ho1，经过产酶诱导培养后，外源添加的血红素能够进入细胞内而被转化为胆绿素。在表达HO1的毕赤酵母GS115‑ho1发酵液中直接添加血红素底物，转化4h后，体系中胆绿素转化产率达到132mg/L，相比于大肠杆菌表达HO1转化血红素为胆绿素的方法，转化产率大幅度提高，转化时间显著缩短，对降低生物转化法合成胆绿素的生产成本具有显著效果。
一种重组酵母基因工程及其生物合成胆绿素中的应用

[发明专利]一种基于PqsA配体的铜绿假单胞菌群体感应抑制剂筛选方法-CN202310524125.3在审
发明人：易喻;林素素;公学旺;梅建凤;应国清 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2023-05-11 - 公布日： 2023-08-29 - 主分类号： G01N30/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于PqsA配体的铜绿假单胞菌群体感应抑制剂筛选方法。所述方法为PqsA靶点蛋白通过基因融合携带SpyTag标签，然后将其一步定向固定于接枝SpyCatcher蛋白的多糖载体上，以此制备色谱柱，通过动态亲和色谱，从天然植物活性组分中筛选铜绿假单胞菌群体感应抑制剂。本发明方法采用的亲和筛选配基为PqsA靶点蛋白，并通过异肽键一步定向固定，从而实现铜绿假单胞菌群体感应抑制剂的快速筛选。该方法具有制备简单，定向固定，快速靶向筛选等优点，可有效提高群体感应抑制剂筛选的成功率，降低工作量和筛选成本。
一种基于 pqsa 铜绿假单胞菌群体感应抑制剂筛选方法

[发明专利]一种用于生物合成胆红素的重组大肠杆菌及其应用-CN202310623616.3在审
发明人：梅建凤;季军情;陈乐生;应国清;易喻 -专利权人：浙江工业大学;上海和不同科技有限公司
申请日： 2023-05-29 - 公布日： 2023-08-08 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种用于生物合成胆红素的重组大肠杆菌及其应用，所述重组大肠杆菌同时表达沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)来源的5‑氨基乙酰丙酸合成酶、集胞藻(Synechocystis sp.)来源的血红素加氧酶和胆绿素还原酶。本发明重组大肠杆菌在不添加外源血红素的条件下，经发酵后，按发酵液体积计，胆红素的发酵产率为12.3mg/L，干菌体中胆红素的含量可达0.315％。本发明开辟了一种非动物胆汁来源的胆红素生产方法，对降低胆红素的生产成本具有显著效果。
一种用于生物合成胆红素重组大肠杆菌及其应用

[发明专利]一种微生物发酵草鱼蛋白制备抗氧化多肽的方法-CN202310194876.3在审
发明人：梅建凤;王雪;王旭东;易喻;应国清 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2023-03-03 - 公布日： 2023-08-01 - 主分类号： C12P21/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种微生物发酵草鱼蛋白制备抗氧化多肽的方法，所述方法是将草鱼肉泥加水，调节pH为7.2–7.6，经巴氏杀菌；接入粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)，于30℃、100–150r/min振荡培养26–30h；于63–65℃水浴保温20–30min杀菌灭酶，离心，收集上清液；上清液经超滤膜过滤，收集滤液，得多肽液；减压浓缩，浓缩液冷冻干燥，得抗氧化多肽。本发明用粘质沙雷氏菌为发酵菌种，以草鱼蛋白为原料制备抗氧化多肽，具有较强的抗氧化活性。本发明方法与蛋白酶水解法相比，节省了酶的使用成本，且具有方法简单、多肽得率高、环境友好、易于实现工业化应用的优点。
一种微生物发酵草鱼蛋白制备氧化多肽方法

[发明专利]臭曲霉SLP7-15及其在提取石榴皮多酚中的应用-CN202310268728.1在审
发明人：梅建凤;韩彦超;易喻;张彦璐;应国清 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2023-03-13 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种臭曲霉SLP7‑15及其在提取石榴皮多酚中的应用，将臭曲霉SLP7‑15培养获得的发酵液过滤，滤液与石榴皮粉混合，于35–40℃条件酶解4–6h，补充去离子水和无水乙醇，超声提取，抽滤，减压蒸干，无水乙醇溶解和真空干燥，得多酚提取物。在乙醇超声提取石榴皮多酚前，增加了臭曲霉SLP7‑15发酵制备的粗酶液酶解，有助于多酚类物质溶出，使多酚提取得率显著提高。本发明提供的微生物酶解辅助提取石榴皮多酚的方法，较直接采用乙醇超声提取法相比，多酚的提取得率可以提高26.6％。
曲霉 slp7 15 及其提取石榴皮中的应用

[发明专利]少根根霉DS6-14及其在党参多糖提取中的应用-CN202211715330.X在审
发明人：沈施琰;王雪;梅建凤;易喻;应国清 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2022-12-28 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一株少根根霉DS6‑14及其在党参多糖提取中的应用。少根根霉DS6‑14保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号GDMCC No:63063，保藏日期2022年12月20日，该菌株是针对能够水解党参细胞壁而有目的分离和筛选获得。在从党参中提取多糖前，增加了少根根霉DS6‑14发酵预处理，菌体在添加蔗糖的党参粉中适度生长，产生多种水解酶，之后，经发酵的党参粉加水保温酶解，细胞壁中的纤维素、半纤维素和果胶等物质被水解，有助于结合态的党参多糖在超声水提时溶出，从而能够显著提高多糖的提取得率。较不采用发酵预处理的常规方法相比，党参多糖的提取得率提高46.7％。
根根 ds6 14 及其党参多糖提取中的应用

[发明专利]一种微生物酶解辅助提取枇杷叶总黄酮的方法-CN202211567122.X在审
发明人：梅建凤;宁恬;赵翔;易喻;应国清 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2022-12-07 - 公布日： 2023-05-16 - 主分类号： A61K36/73 文献下载
摘要：本发明公开了一种微生物酶解辅助提取枇杷叶总黄酮的方法，垫状青霉(Penicillium pulvillorum)EJ2‑16经产酶培养基培养，获得的发酵液过滤，收集的滤液为粗酶液；将粗酶液与枇杷叶粉混合，于40–45℃条件酶解4–5h，再往酶解体系中加入粗酶液体积2.0–2.5倍的无水乙醇超声提取，抽滤，得总黄酮提取液；总黄酮提取液经减压蒸干，乙醇溶解、离心和真空干燥，得总黄酮提取物。本发明提供的枇杷叶微生物酶解方法，较直接采用乙醇超声提取法相比，从枇杷叶中提取总黄酮的得率可以提高35.8％。
一种微生物辅助提取枇杷叶黄酮方法

[发明专利]大肠杆菌zjut-mhol及其在产血红素加氧酶-1中的应用-CN202210819968.1在审
发明人：梅建凤;郑素晶;应国清;易喻;陈建澍;张彦璐 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2022-07-12 - 公布日： 2023-04-18 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种大肠杆菌zjut‑mhol及其在产血红素加氧酶‑1中的应用，本发明合成并克隆了小鼠来源的HO‑1经偏好密码子优化的基因，构建了能够产HO‑1的基因重组大肠杆菌，并经过紫外线诱变，获得一株酶活力高、传代稳定的突变株，可应用于HO‑1的制备。该菌株经产酶培养，获得具有胞内活性HO‑1的菌体，产酶活力按干菌体质量计为122U/g。从菌体分离获得HO‑1冻干粉，冻干粉的酶活力为91.8U/g。
大肠杆菌 zjut mhol 及其血红素加氧酶中的应用

[发明专利]土曲霉HBJ5-32及其在提取杭白菊总黄酮中的应用-CN202211069229.1在审
发明人：梅建凤;吴涛;冯浩南;应国清;易喻 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2022-09-02 - 公布日： 2023-04-14 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种土曲霉(Aspergillus terreus)HBJ5‑32及其在提取杭白菊总黄酮中的应用，将土曲霉HBJ5‑32培养获得的发酵液过滤，收集的滤液即为粗酶液；将粗酶液与杭白菊粉混合，于35–40℃条件酶解4–6h，再往酶解体系中加入无水乙醇后进行超声提取，抽滤，得总黄酮提取液；总黄酮提取液经减压蒸干，无水乙醇溶解，浓缩和真空干燥，得总黄酮提取物。本发明提供的杭白菊微生物酶解方法，较直接采用乙醇超声提取法相比，从杭白菊中提取总黄酮的得率可以提高26.8％。
曲霉 hbj5 32 及其提取白菊黄酮中的应用

[发明专利]垫状青霉EJ2-16及其在提取枇杷叶多糖中的应用-CN202211566128.5在审
发明人：梅建凤;赵翔;宁恬;易喻;应国清 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2022-12-07 - 公布日： 2023-04-07 - 主分类号： C12N1/14 文献下载
摘要：本发明公开了一种垫状青霉EJ2‑16及其在提取枇杷叶多糖中的应用，将枇杷叶粉中加入垫状青霉EJ2‑16的孢子液，搅拌均匀后于30℃发酵64–72h，获得枇杷叶发酵物；枇杷叶发酵物中加入去离子水，搅拌均匀后于40–45℃保温2–3h，经超声水提后浓缩，获得枇杷叶水提浓缩物；枇杷叶水提浓缩物中加入乙醇使多糖沉淀，沉淀物经乙醇洗涤和干燥后，获得枇杷叶多糖。本发明在从枇杷叶中提取多糖前，增加了微生物发酵预处理，经发酵的枇杷叶粉加水保温酶解，有助于结合态的枇杷叶多糖在超声水提时溶出，从而能够显著提高多糖的提取得率。较不采用发酵预处理的常规方法相比，枇杷叶多糖的提取得率可以提高62.4％。
青霉 ej2 16 及其提取枇杷叶多糖中的应用

[发明专利]一种利用微生物酶解法提取杭白菊多糖的方法-CN202211069240.8在审
发明人：梅建凤;冯浩南;吴涛;应国清;易喻 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2022-09-02 - 公布日： 2023-04-04 - 主分类号： C08B37/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用微生物酶解法提取杭白菊多糖的方法，土曲霉(Aspergillus terreus)HBJ5‑32经产酶培养，获得的发酵液过滤，收集的滤液即为粗酶液；将粗酶液与杭白菊粉混合，于35–40℃条件下酶解6–8h，得杭白菊酶解物；酶解物经热水超声提取，滤液浓缩后，获得杭白菊水提浓缩物；再将浓缩物加乙醇使多糖沉淀，沉淀物经乙醇洗涤和干燥后，获得杭白菊多糖；本发明在杭白菊热水超声提取多糖前，增加了微生物发酵制备的粗酶液酶解，较不采用微生物酶解的常规方法相比，杭白菊多糖的提取得率可以提高55.3％。
一种利用微生物解法提取白菊多糖方法

[发明专利]一种提高槐角中染料木素含量的方法-CN201910061612.4有效
发明人：陈翔;梅建凤;卢蓝天;陈才军;李彬;应国清 -专利权人：舟山市食品药品检验检测研究院;浙江工业大学
申请日： 2019-01-23 - 公布日： 2022-11-25 - 主分类号： C12P17/06 文献下载
摘要：本发明公开了一种提高槐角中染料木素含量的方法，所述方法为：将槐角加入糖苷酶粗酶液中，在30‑35℃、100‑200r/min的振荡条下转化24‑72h(优选30℃、24h)，过滤除去粗酶液，滤饼烘干，即得富含染料木素的槐角；所述糖苷酶粗酶液是米根霉GDMCC No:60145发酵液过滤除去菌体获得的滤液。槐角中的染料木素含量提高幅度大，最高可达21.5倍，含量由原来的2.34mg/g提高到52.7mg/g；本发明具有专一性好、产物结构不会被破坏、生物催化剂的成本低，且可使槐角中多种糖苷转化为染料木素，其含量提高幅度大。
一种提高槐角染料含量方法

[发明专利]脂肪链修饰的人粒细胞集落刺激因子衍生物及其制备方法-CN202110546154.0在审
发明人：王旭东;刘家辉;应国清;梅建凤;易喻 -专利权人：浙江工业大学
申请日： 2021-05-19 - 公布日： 2022-11-22 - 主分类号： C07K14/535 文献下载
摘要：本发明涉及一种脂肪链修饰的人粒细胞集落刺激因子衍生物，源自脂肪链‑马来酰亚胺定点修饰人粒细胞集落刺激因子游离的半胱氨酸残基，其制备方法包括脂肪链‑马来酰亚胺的合成、脂肪链修饰的人粒细胞集落刺激因子衍生物合成、产物分离纯化和表征。与未修饰的人粒细胞集落刺激因子相比，脂肪链修饰的人粒细胞集落刺激因子衍生物具有高的体外活性保留率，在试验动物体内持续作用时间延长，减少了给药频率，提高了药物生物利用度和疗效。
脂肪修饰粒细胞集落刺激因子衍生物及其制备方法

[发明专利]一种生物转化法合成胆红素的方法-CN202110093249.1有效
发明人：梅建凤;吴霞;陈乐生;郑素晶;季军情;易喻;应国清 -专利权人：浙江工业大学;上海和不同科技有限公司
申请日： 2021-01-25 - 公布日： 2022-10-11 - 主分类号： C12P17/16 文献下载
摘要：本发明公开了一种生物转化法合成胆红素的方法，将表达胆绿素还原酶的重组大肠杆菌菌株产酶培养后的发酵液离心，收集菌体，经蒸馏水洗涤后作为生物催化剂，以pH 5.8、0.1mol/L的柠檬酸缓冲液为反应介质，加入胆绿素为底物，以甲醇为助溶剂构成转化体系，在35–37℃、100–200r/min恒温振荡条件下转化10–14h，转化反应结束后，将转化液离心，收集菌体，获得含胆红素的菌体，分离提取，获得胆红素。本发明含胆红素的菌体中胆红素的含量最高可达2.02％，是猪胆汁中胆红素含量0.05％的40.4倍，从菌体中提取胆红素的步骤相对简单，对降低胆红素的生产成本具有显著效果。
一种生物转化合成胆红素方法

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