[发明专利]一种通过敲除黄素还原酶提高L-精氨酸产量的方法有效
| 申请号： | 201610592588.3 | 申请日： | 2016-07-26 |
| 公开（公告）号： | CN106190942B | 公开（公告）日： | 2019-11-26 |
| 发明（设计）人： | 饶志明;满在伟;徐美娟;杨套伟;张显 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12P13/10;C12R1/15 |
| 代理公司： | 23211 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 | 代理人： | 耿晓岳<国际申请>=<国际公布>=<进入 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种通过敲除黄素还原酶提高L‑精氨酸产量的方法，属于微生物发酵生产氨基酸技术领域。本发明通过将钝齿棒杆菌SDNN403中编码假定NADPH‑依赖型FMN还原酶基因frd1和frd2在E.coli BL21中过表达并纯化出目标蛋白Frd181和Frd188，对其功能进行鉴定，结果表明Frd181和Frd188蛋白均为产H2O2NAD(P)H‑依赖型黄素还原酶。以钝齿棒杆菌SDNN403基因组为模板，通过重叠延伸PCR获取frd1和frd2基因缺失片段，并连接pK18mobsacB，得到敲除质粒pK18mobsacB‑Δfrd1和pK18mobsacB‑Δfrd2，通过电击转化钝齿棒杆菌SDNN403，二次筛选得到重组菌株403Δfrd1和403Δfrd2。摇瓶发酵发现，通过敲除frd1和frd2基因，L‑精氨酸产量明显提高。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 通过 黄素 还原酶 提高 精氨酸 产量 方法 | ||
【主权项】：
1.一种钝齿棒杆菌重组菌，其特征在于，所述重组菌是缺失了NADPH-依赖型FMN还原酶基因frd1和frd2的钝齿棒杆菌；所述钝齿棒杆菌重组菌是将钝齿棒杆菌(Corynebacteriumcrenatum)CGMCC NO:0890中的NADPH-依赖型FMN还原酶基因敲除得到的；所述NADPH-依赖型FMN还原酶基因frd1、frd2的核苷酸序列分别如SEQ NO.1、SEQ NO.2所示。/n
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- 孙超;张汝兵;咸漠;董先娟 - 中国科学院青岛生物能源与过程研究所
- 2019-10-18 - 2020-01-10 - C12N1/21
- 一种合成D‑柠檬烯的基因工程菌及其构建方法与应用，涉及基因工程及发酵工程领域，本发明在所述基因工程菌中过表达HMG‑CoA合成酶基因mvaS、乙酰CoA乙酰基转移酶mvaE、牦牛儿基焦磷酸合成酶GPPS基因、D‑柠檬烯合成酶基因ClLS、MVA激酶ERG12基因、MVAP激酶ERG8基因、甲羟戊酸脱羧酶ERG19基因、异戊焦磷酸异构酶IDI基因。在LB培养基中摇瓶发酵后，能够异源合成D‑柠檬烯，D‑柠檬烯的产量27.3mg/L发酵液。本发明可用于D‑柠檬烯工业化生产。
- 一种原核工程菌株及其制备方法和应用-201910911590.6
- 万霞;陈文超;黄凤洪;邓乾春;朱航志;蒋珊 - 中国农业科学院油料作物研究所
- 2019-09-25 - 2020-01-07 - C12N1/21
- 本发明公开了一种原核工程菌株及其制备方法和应用，属于生物技术领域。该原核工程菌株表达的蛋白为甘油二酯乙酰化转移酶，甘油二酯乙酰化转移酶的氨基酸序列表中SEQ ID NO:1所示。该制备方法包括：将DAcT基因与载体连接，得到连接产物；将连接产物转入感受态细胞中，得到转化产物；将转化产物于37℃下200rpm摇床培养0.6～1h，得到复苏液；将复苏液离心，得到浓缩液；将浓缩液涂布在含卡那霉素抗性的固体培养基上，于37℃下培养8～12h。该原核工程菌株在25℃下培养24‑48h后，在细胞内合成高纯度的乙酰化甘油三酯，可以通过该原核工程菌株实现高纯度乙酰化甘油三酯的规模化生产。该制备方法能够获得原核工程菌株，为乙酰化甘油三酯进行规模化生产提供基础。
- 高效生产乙烯的海洋蓝藻工程菌的制备方法及应用-201911132091.3
- 郑正高;吉雅晴;董春霞;李荣贵 - 青岛大学
- 2019-11-19 - 2020-01-07 - C12N1/21
- 本发明公开了一种高效生产乙烯的海洋蓝藻工程菌的制备方法及应用，通过将强启动子驱动的efe基因整合到聚球藻PCC 7002的内源质粒pAQ1上，而非染色体或其它质粒上，获得了高产率、高稳定性且生长速度快的产乙烯工程菌，为利用海水培养蓝藻并高效生产乙烯提供了一条途径，在降低培养成本的基础上还能增加乙烯产量。本发明菌利用海洋蓝藻合成乙烯，在开发利用丰富的海洋资源的基础上还能促进乙烯制造产业尽早转型，将产生巨大的经济价值，更能降低现今乙烯传统合成伴随的环境污染。
- 一种抗酸胁迫重组乳酸菌及其构建方法-201711351158.3
- 张娟;陈坚;堵国成;朱政明 - 江南大学
- 2017-12-15 - 2020-01-07 - C12N1/21
- 本发明公开了一种抗酸胁迫重组乳酸菌及其构建方法，属于生物工程技术领域。本发明通过在乳酸乳球菌L.lactis NZ9000中过量表达了来源于乳酸乳球菌L.lactis NZ9000的LtrC基因，得到了一株酸胁迫抗性能力显著提高的重组乳酸乳球菌L.lactis NZ9000(pNZ8148/LtrC)。pH 4.0条件下胁迫3h，重组菌株的存活率为对照的3.6倍。本发明还提供了一种提高酸胁迫抗性的方法，该方法具有良好的工业应用价值。
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