[发明专利]一种构建产黄素单核苷酸的工程菌株的方法及其应用在审
| 申请号： | 201710310871.7 | 申请日： | 2017-05-05 |
| 公开（公告）号： | CN108330136A | 公开（公告）日： | 2018-07-27 |
| 发明（设计）人： | 王华;杨昀;郭林 | 申请（专利权）人： | 北京航空航天大学 |
| 主分类号： | C12N15/63 | 分类号： | C12N15/63;C12P19/32 |
| 代理公司： | 北京慕达星云知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 11465 | 代理人： | 王鹏 |
| 地址： | 100191*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种构建产黄素单核苷酸的工程菌株的方法及其应用。构建产黄素单核苷酸的工程菌株的方法，采用合成生物学技术，在新构建或者已有的核黄素发酵菌内，调节细胞内黄素池组分及内膜分泌，新颖性地加入细胞膜间质内的酶催化步骤，实现了微生物发酵产高纯度的黄素单核苷酸。具体方法是(1)在核黄素发酵菌内，引入双功能酶——核黄素激酶/黄素腺嘌呤二核苷酸生成酶，将细胞内黄素池组分从核黄素转化为黄素腺嘌呤二核苷酸；(2)引入黄素腺嘌呤二核苷酸内膜转运蛋白，将细胞内的黄素腺嘌呤二核苷酸转运至细胞膜间质内；(3)引入5'‑核苷酸酶，将细胞膜间质内的黄素腺嘌呤二核苷酸裂解转化为黄素单核苷酸。在摇瓶发酵条件下，黄素单核苷酸的发酵纯度(占总黄素类化合物)高达92.4％。 | ||
| 搜索关键词： | 黄素单核苷酸 黄素腺嘌呤二核苷酸 核黄素 构建 细胞膜 工程菌株 黄素 间质 发酵菌 细胞 内膜 引入 合成生物学 微生物发酵 核苷酸酶 类化合物 双功能酶 摇瓶发酵 转运蛋白 激酶 高纯度 酶催化 裂解 分泌 转化 转运 发酵 应用 | ||
【主权项】：
1.一种构建产黄素单核苷酸的工程菌株的方法，其特征在于，该方法的具体步骤包括:(1)在核黄素发酵菌内，引入核黄素激酶/黄素腺嘌呤二核苷酸生成酶的双功能酶基因，生成的核黄素激酶/黄素腺嘌呤二核苷酸生成酶，将细胞内黄素池组分从核黄素转化为黄素腺嘌呤二核苷酸；(2)在步骤(1)获得的具有双功能酶的核黄素发酵菌内，引入黄素腺嘌呤二核苷酸内膜转运蛋白基因，生成的黄素腺嘌呤二核苷酸内膜转运蛋白将细胞内的黄素腺嘌呤二核苷酸转运至细胞膜间质内；(3)在步骤(2)获得的具有黄素腺嘌呤二核苷酸内膜转运蛋白的核黄素发酵菌内，引入5'‑核苷酸酶基因，生成的5'‑核苷酸酶，将细胞膜间质内的黄素腺嘌呤二核苷酸裂解催化为黄素单核苷酸。
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