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[发明专利]一种耐低温低盐的蓝藻藻胆体样品的制备方法-CN202210812369.7有效
发明人： 郑正高;王宏蕊;董春霞;赵进东 -专利权人：北京大学
申请日： 2022-07-12 - 公布日： 2022-09-27 - 主分类号： G01N1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种耐低温低盐的蓝藻藻胆体样品的制备方法。与常规的蓝藻藻胆体体外纯化方法相比，本发明包含了一特殊处理步骤：在蔗糖梯度纯化的磷酸盐缓冲液中加入终浓度为0.0075~0.015%（w/v）的1,5‑戊二醛（GA）和10~500 nM的BS3两种交联剂。所得到的藻胆体样品在4℃和10 mM磷酸盐的低温低盐条件下，可以在48 h内维持其稳定结构，而不会解聚。该耐低温低盐的藻胆体为冷冻电镜解析藻胆体结构，体外研究藻胆体与光系统复合体的相互作用以及能量传递的机制等提供了可能性。
一种低温低盐蓝藻藻胆体样品制备方法

[发明专利]一种蓝藻藻胆体冷冻电镜制样的方法-CN202110608802.0有效
发明人： 郑正高;郑吕钦;张正东;董春霞;高宁;赵进东 -专利权人：北京大学
申请日： 2021-06-01 - 公布日： 2021-12-28 - 主分类号： G01N23/2202 文献下载
摘要：本发明公开了一种蓝藻藻胆体冷冻电镜制样的方法，通过对体外纯化的蓝藻藻胆体蛋白进行交联，以及“正面上样，反面稀释”的上样方式克服了藻胆体常规冷冻制样的解聚、衬度差和优势取向的三大难点，应用本发明方法可以解析出了蓝藻藻胆体近原子级的高分辨率结构信息，为今后利用冷冻电镜解析各类蓝藻藻胆体的高分率结构提供了一种有效的方法。
一种蓝藻藻胆体冷冻电镜制样方法

[发明专利]一种高效固氮的蓝藻工程菌及其制备方法和应用-CN202110264337.3有效
发明人： 郑正高;王宏蕊;董春霞;赵进东 -专利权人：北京大学
申请日： 2021-03-11 - 公布日： 2021-09-28 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效固氮的蓝藻工程菌及其制备方法和应用，通过敲除野生型鱼腥藻PCC 7120的细胞分裂相关因子FTN的基因，得到异形胞体积约是正常异形胞体积2倍大小的鱼腥藻工程菌△FTN。该鱼腥藻工程菌△FTN的固氮酶活性是野生型的2.3倍，且生长速度较快，代时约为20小时，具有在农业上推广应用的前景，为固氮蓝藻在农业生产上的应用提供了一个新的选择。
一种高效固氮蓝藻工程及其制备方法应用

[发明专利]一步转化标记蓝藻染色体的方法和应用-CN202110284596.2在审
发明人： 郑正高;刘轶群;董春霞;赵进东 -专利权人：北京大学
申请日： 2021-03-17 - 公布日： 2021-06-29 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一步转化标记蓝藻染色体的方法和应用。本发明将四环素操纵子中的抑制蛋白TetR特异性与操纵DNA序列TetO相结合，通过一步遗传转化将TetR‑GFP融合蛋白及TetO×n序列阵列转到蓝藻基因组染色体上，然后利用启动子诱导TetR‑GFP融合蛋白的表达，表达后的TetR‑GFP融合蛋白与染色体上的TetO×n序列结合，最终得到染色体发绿色荧光的蓝藻阳性藻株，能够在荧光显微镜下观测到染色体的数目以及动态信息，从而可以将该染色体荧光标记藻株作为研究蓝藻染色体的复制和分离机制的一种理想材料。
一步转化标记蓝藻染色体方法应用

[发明专利]产酰胺酶类溶菌酶的蓝藻工程菌及其应用-CN202010217326.5有效
发明人： 郑正高;董春霞;赵进东 -专利权人：北京大学
申请日： 2020-05-08 - 公布日： 2021-06-18 - 主分类号： C12N9/36 文献下载
摘要：本发明涉及一种酰胺酶类溶菌酶、所述酰胺酶类溶菌酶的表达载体以及表达系统，尤其涉及产酰胺酶类溶菌酶的蓝藻工程菌及其应用。采用本发明提供的蓝藻工程菌表达并纯化得到酰胺酶类溶菌酶，具有较高的抑菌活性以及酶解肽聚糖的活性，具有重要的医用抗菌、食品防腐、科研工具酶等价值。
产酰胺酶类溶菌酶蓝藻工程及其应用

[发明专利]一步转化进行蓝藻基因无痕敲除的方法-CN201911148764.4有效
发明人： 郑正高;董春霞;王宏蕊;赵进东 -专利权人：北京大学
申请日： 2019-11-21 - 公布日： 2021-03-23 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公开了一种一步转化进行蓝藻基因无痕敲除的方法，通过一步遗传转化将两个同向loxP序列以及序列之间包括的诱导型启动子驱动的Cre基因和选择标记基因序列替换目的基因，然后利用诱导型启动子诱导Cre重组酶的表达，最终获得无痕敲除的突变体。该方法只需要进行一步遗传转化，通过控制培养基中诱导条件来达到蓝藻基因的无痕敲除，大幅度缩短了在蓝藻中进行无痕敲除的时间，且能降低培养成本，减少抗生素使用和基因对环境的污染，也为今后更快速地开发各种优质无抗性的蓝藻工程菌底盘生物提供了一种方法。
一步转化进行蓝藻基因无痕敲方法

[发明专利]利用蓝藻黄素蛋白FNR直观检测目的蛋白表达纯化的方法-CN201710908190.0有效
发明人： 郑正高;董春霞;吉雅晴;李荣贵 -专利权人：青岛大学
申请日： 2017-09-29 - 公布日： 2020-10-02 - 主分类号： C12N15/62 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用蓝藻黄素蛋白FNR直观检测目的蛋白表达纯化的方法，首先构建目的蛋白基因与蓝藻fnr基因或其同源基因的融合基因，并将含该融合基因的表达载体转入表达菌种中进行表达，通过观察表达菌液破碎后的上清液和/或其纯化组分的颜色来判断融合蛋白是否被成功表达和/或纯化，如果上清液和/或纯化组分偏黄色，说明目的蛋白与蓝藻FNR蛋白或其同源蛋白一起被表达和/或纯化。该方法实现了对目的蛋白表达纯化的直观检测，方便快捷。
利用蓝藻黄素蛋白 fnr 直观检测目的表达纯化方法

[发明专利]一种高效检测蓝藻细胞周期的方法-CN201710646653.0有效
发明人： 郑正高;董春霞;赵进东 -专利权人：北京大学
申请日： 2017-08-01 - 公布日： 2020-06-26 - 主分类号： C12Q1/6897 文献下载
摘要：本发明公布了一种高效检测蓝藻细胞周期的方法，利用酰胺酶AmiC3或其同源蛋白和荧光蛋白的融合蛋白来标记蓝藻细胞分裂环，通过观测荧光显示的蓝藻细胞分裂环出现的状态来判断其细胞周期。本发明解决了目前蓝藻不能很好的进行细胞周期检测的技术问题，为研究蓝藻细胞分裂与分化的联系提供了一条途径，也为通过检测细胞周期来评定蓝藻的生长状态提供了一条便捷直观的方法。
一种高效检测蓝藻细胞周期方法

[发明专利]高效生产乙烯的海洋蓝藻工程菌的制备方法及应用-CN201911132091.3在审
发明人： 郑正高;吉雅晴;董春霞;李荣贵 -专利权人：青岛大学
申请日： 2019-11-19 - 公布日： 2020-01-07 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：本发明公开了一种高效生产乙烯的海洋蓝藻工程菌的制备方法及应用，通过将强启动子驱动的efe基因整合到聚球藻PCC 7002的内源质粒pAQ1上，而非染色体或其它质粒上，获得了高产率、高稳定性且生长速度快的产乙烯工程菌，为利用海水培养蓝藻并高效生产乙烯提供了一条途径，在降低培养成本的基础上还能增加乙烯产量。本发明菌利用海洋蓝藻合成乙烯，在开发利用丰富的海洋资源的基础上还能促进乙烯制造产业尽早转型，将产生巨大的经济价值，更能降低现今乙烯传统合成伴随的环境污染。
乙烯高效生产海洋蓝藻传统合成非染色体高稳定性海水培养合成乙烯基因整合内源质粒强启动子乙烯工程伴随的高产率工程菌聚球藻蓝藻海洋资源质粒转型制备驱动生长应用制造开发

[发明专利]无抗生素表达外源基因的蓝藻工程菌系统及其制备和应用-CN201610564902.7有效
发明人： 郑正高;董春霞;赵进东 -专利权人：北京大学
申请日： 2016-07-18 - 公布日： 2019-09-13 - 主分类号： C12N15/74 文献下载
摘要：本发明公布了一种无抗生素表达外源基因的蓝藻工程菌系统及其制备和应用。所述蓝藻工程菌表达系统包括：聚球藻PCC7002的△psbC突变体和整合载体，整合载体具有核心元件FlanKA—P₁—MCS—P₂—psbC—FlanKB，其中同源片段FlanKA和FlanKB能将P₁—MCS—P₂—psbC片段整合到聚球藻PCC7002内源质粒pAQ3的C0006和C0007的基因间区；外源基因插入到多克隆位点MCS中，由启动子P₁调控表达；P₂—psbC用来回复psbC基因缺失。本发明让蓝藻不用依赖抗生素培养压力来高效表达外源基因，不仅可大大降低利用蓝藻做生物反应器的成本，更可以减少因抗生素造成的环境污染和不安全性。
抗生素表达基因蓝藻工程系统及其制备应用

[发明专利]利用蓝藻蛋白RbrA直观检测目的蛋白表达纯化的方法-CN201710906063.7在审
发明人： 郑正高;李西莹;董春霞;李荣贵 -专利权人：青岛大学
申请日： 2017-09-29 - 公布日： 2018-02-13 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用蓝藻含铁紫红色蛋白RbrA直观检测目的蛋白表达纯化的方法，首先构建目的蛋白基因与蓝藻rbrA基因或其同源基因的融合基因，并将含该融合基因的表达载体转入表达菌种中进行表达，通过观察表达菌液破碎后的上清液和/或其纯化组分的颜色来判断融合蛋白是否被成功表达和/或纯化，如果上清液和/或纯化组分偏紫红色，说明目的蛋白与蓝藻RbrA蛋白或其同源蛋白一起被表达和/或纯化。该方法实现了对目的蛋白表达纯化的直观检测，方便快捷。
利用蓝藻蛋白 rbra 直观检测目的表达纯化方法

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