一种多色免疫荧光染色方法及试剂盒,该方法包括:直标步骤,包括使用直标抗体对待测样本进行孵育,获得标记有直标抗体的样本;多重染色步骤,包括按照抗原组中的抗原顺序,使用对应的一抗依次对标记有直标抗体的样本进行孵育,使用染色剂对孵育后的样本进行染色,得到染色后的样本。本发明实现多6标mIF Pa nel的多色免疫荧光染色,能够在一张组织切片上同时表达六个抗体,在此基础上加1标、2标、3标进行开发,同时对9标10色mIF Panel进行了性能验证,本发明可以为病理医生提供更多的靶标蛋白质信息和共定位情况,可以大大提高染色效率,节约样本。