本发明属于基因工程和酶工程领域,具体涉及一种编码L‑丙氨酸氧化酶的基因及其应用。本发明提供一种编码L‑丙氨酸氧化酶的基因,其是从已构建的酵母菌cDNA文库中获得,该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO1所示。所述编码L‑丙氨酸氧化酶基因经过克隆后与表达质粒连接构建重组表达质粒,重组表达质粒线性化与纯化后转化受体菌,筛选获得基因工程菌,经过诱导表达、纯化鉴定后获得L‑丙氨酸氧化酶。本发明获得的L‑丙氨酸氧化酶可实现不对称降解法降解DL‑丙氨酸中的L‑丙氨酸,从而积累D‑丙氨酸,是一种生产D‑丙氨酸的新型方法,本方法既提高其降解效率、缩短生产D‑丙氨酸的工艺路线、降低生产成本又减少环境污染。