本发明公开了重症免疫缺陷猪源重组细胞及其制备方法。具体来说，本发明涉及IL2RG基因、RAG1基因和RAG2基因这三个基因联合敲除的重症免疫缺陷猪源重组细胞，以及用于制备该重组细胞的方法，以及用于制备该重组细胞的试剂盒。本发明提供了sgRNA组合，由sgRNAIL2RG‑g7、sgRNARAG1‑g4和sgRNARAG2‑g2组成。sgRNAIL2RG‑g7的靶序列结合区如SEQ ID NO：24中第1‑20位核苷酸所示。sgRNARAG1‑g4的靶序列结合区如SEQ ID NO：9中第1‑20位核苷酸所示。sgRNARAG2‑g2的靶序列结合区如SEQ ID NO：13中第1‑20位核苷酸所示。本发明为重症免疫缺陷猪模型的制备奠定了坚实的基础，对于重症免疫缺陷药物的研发具有重大应用价值。
本发明公开了一种CRISPR/Cas9系统及其在构建抗肌萎缩蛋白基因缺陷的猪源重组细胞中的应用。本发明提供了sgRNA组合，由sgRNADMD‑Ug3(靶序列结合区如SEQ ID NO：8中第1‑20位核苷酸所示)和sgRNADMD‑Dg3(靶序列结合区如SEQ ID NO：11中第1‑20位核苷酸所示)组成。本发明提供了试剂盒，由转录得到sgRNADMD‑Ug3的质粒pKG‑U6gRNA(DMD‑Ug3)、转录得到sgRNADMD‑Dg3的质粒pKG‑U6gRNA(DMD‑Dg3)和质粒pKG‑GE3组成。所述sgRNA组合或所述试剂盒可用于制备重组细胞或制备杜氏肌营养不良症动物模型。所述重组细胞为抗肌萎缩蛋白基因缺陷的细胞，可用于体细胞克隆制备动物疾病模型。本发明为杜氏肌营养不良症猪模型的制备奠定了坚实的基础，对于杜氏肌营养不良症药物的研发具有重大应用价值。
本发明公开了IL2RG基因和ADA基因联合敲除的重组细胞及其在制备免疫缺陷猪模型中的应用。本发明提供了由sgRNAIL2RG‑g7和sgRNAADA‑g7组成的sgRNA组合在制备试剂盒中的应用。本发明还提供了一种sgRNA组合，由sgRNAIL2RG‑g7和sgRNAADA‑g7组成。所述sgRNAIL2RG‑g7的靶序列结合区如SEQ ID NO：12中第1‑20位核苷酸所示；所述sgRNAADA‑g7的靶序列结合区如SEQ ID NO：22中第1‑20位核苷酸所示。本发明还保护所述sgRNA组合在制备重组细胞中的应用以及在制备免疫缺陷动物模型中的应用。本发明为重症免疫缺陷猪模型的制备奠定了坚实的基础，对于重症免疫缺陷药物的研发具有重大应用价值。
