本发明涉及基于多重PCR及高通量测序技术检测耳聋基因致病变异的特异性引物、试剂盒及应用，可以高效率、低成本、全面化的诊断大部分遗传性耳聋；还可以用于新生儿筛查，早发现早治疗，减少“因聋致哑”，其解决的技术方案是，该多重PCR特异性引物包括34对特异性引物，分成两个Pool，Pool‑1包含18对引物，核酸序列如SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：36所示；Pool‑2包含16对引物，核酸序列如SEQ ID NO：37‑68所示，本发明可有效提高检测效率、准确率，同时降低成本、简化操作步骤，是检测耳聋基因致病变异的特异性引物上的创新。
本发明公开二代DNA测序样本的特异性标签防错试剂盒，试剂盒中包括了十组DNA序列以及一对特异性引物，其中：十组DNA序列包括SEQ ID 1、SEQ ID 2、SEQ ID3、SEQ ID 4、SEQ ID 5、SEQ ID 6、SEQ ID 7、SEQ ID 8、SEQ ID 9和SEQ ID 10；十组DNA序列分别在序列的5’端加上TTCATTAGACTTCAGCCAAAC特异识别序列作为特异性标签、3’端加上CCACTACGCCTCCGCTTTCCTCTCTATGGGCAGTCGGTG特异识别序列作为特异性标签，形成10组特异性DNA序列；一对特异性引物设计如PMPrimer1(上游引物)和PMPrimer2(下游引物)，试剂盒还包括：2ng/μl防错特异性DNA序列；RNA酶抑制剂2μl；一对特异性引物2ng/μl；核酸酶free去离子水5μl。本发明利用非人源的罕见物种序列做为标签DNA加入到整个测序实验体系，伴随样本参与二代测序的全部过程，对检测对象序列进行校验，成本低、操作便捷、精度高。
