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[发明专利]一种兔出血症病毒2型衣壳蛋白基因重组杆状病毒、疫苗及其制备方法和应用-CN202010608699.5在审
发明人：范志宇;王芳;胡波;宋艳华;魏后军;陈萌萌;仇汝龙;朱伟峰;薛家宾 -专利权人：江苏省农业科学院
申请日： 2020-06-29 - 公布日： 2020-09-25 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种兔出血症病毒2型衣壳蛋白基因重组杆状病毒、疫苗及其制备方法和应用。本发明通过反转录PCR扩增兔出血症病毒2型衣壳蛋白VP60基因，将基因序列进行昆虫细胞密码子优化后合成基因并克隆至真核表达载体中，重组质粒转染Sf9细胞，包装获得表达兔出血症病毒2型VP60蛋白的重组杆状病毒rBAC‑RHDV2‑VP60。以重组杆状病毒接种细胞后表达的VP60蛋白作为抗原，加入氢氧化铝胶佐剂制成兔出血症病毒2型VP60蛋白的基因工程疫苗。本发明可以提供一种免疫效果好、工艺简便的RHDV2 VP60基因工程疫苗，用于预防和控制新发变异型兔出血症毒株RHDV2。
一种出血病毒型衣壳蛋白基因重组杆状病毒疫苗及其制备方法应用

[发明专利]表达新型冠状病毒S基因与流感M1基因嵌合SARS-CoV-2 VLP的构建-CN202010634071.2在审
发明人：金宁一;李昌;许汪;田明尧;陈竞;李乐天;鲁会军;李霄;郝鹏飞;时小双;郝嘉翼 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2020-07-02 - 公布日： 2020-09-18 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及表达新型冠状病毒S基因与流感M1基因嵌合VLP的构建、制备及纯化方法，并通过该方法获得嵌合型新型冠状病毒病毒样颗粒。该方法所述的病毒样颗粒包括使用H5N1 HA蛋白胞内区替换SARS‑CoV‑2 S蛋白胞内区的新型SARS‑CoV‑2 S蛋白与H5N1 M1蛋白，基于杆状病毒‑昆虫细胞表达系统，拯救重组杆状病毒，使用无血清悬浮培养的SF9细胞表达制备，结合蔗糖垫超速离心和蔗糖密度梯度离心纯化获得SARS‑CoV‑2病毒样颗粒。本发明实施例的病毒样颗粒，具有良好的开发与应用前景，能够为SARS‑CoV‑2预防性疫苗构建以及诊断检测提供物质基础。
表达新型冠状病毒基因流感 m1 嵌合 sars cov vlp 构建

[发明专利]一种兔病毒性出血症病毒Ⅱ型VLP疫苗-CN202010472885.0在审
发明人：郭伟伟;向银辉;刘大卫;郭玉广;楚电峰;范根成;杜元钊 -专利权人：青岛易邦生物工程有限公司
申请日： 2020-05-29 - 公布日： 2020-08-25 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供一种兔病毒性出血症病毒的病毒样颗粒及其制备方法，所提供的病毒样颗粒，是重组杆状病毒感染昆虫细胞后，培养收集获得的；所述的重组杆状病毒，其中包含有编码VP60蛋白的核苷酸片段；所述的VP60蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:4。本发明还提供一种兔病毒性出血症病毒亚单位疫苗，包括有抗原和疫苗佐剂，其所用的抗原为本发明制备的病毒样颗粒。VLP在空间构想上更类似与天然病毒，可同时刺激机体产生细胞免疫和体液免疫，免疫效果好，且由于VLP不含有病毒核酸，不存在潜在的病毒致病基因，安全性更高。
一种病毒性出血病毒 vlp 疫苗

[发明专利]PCV2/PCV3二价重组病毒样颗粒及其应用-CN202010450502.X在审
发明人：金宁一;李昌;姜宇航;许汪;李乐天;田明尧;鲁会军;李霄;郝鹏飞;时小双;郝嘉翼 -专利权人：军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所
申请日： 2020-05-25 - 公布日： 2020-08-18 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，特别涉及PCV2/PCV3二价重组病毒样颗粒及其应用。本发明使用杆状病毒昆虫表达系统的双表达核载体对PCV2 Cap及PCV3 Cap进行同时表达，做到一支疫苗同时针对于两种病毒进行免疫，在经济方面做到了降低疫苗价格的好处，使用Bac‑to‑Bac表达系统分别制备PCV2‑PCV3 VLPs，分别将PCV2 Cap与PCV3 Cap插入双表达核的在体中。并成功获得用于包装所用的重组杆状病毒VLPs。经Western Blot、IFA、透射电镜等方法检测，结果显示成功包装出与天然病毒基本一致的PCV2‑PCV3 VLPs。
pcv2 pcv3 二价重组病毒颗粒及其应用

[发明专利]一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F2的重组杆状病毒的构建方法-CN202010426111.4在审
发明人：叶建强;隆玉兰;秦爱建;张伟;王伟康;谢泉;张建军;李拓凡;万志敏;邵红霞 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-05-19 - 公布日： 2020-08-14 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种表达血清4型禽腺病毒纤突蛋白F2的重组杆状病毒的构建方法，包括以下步骤：（1）构建FAdV‑4‑F2基因重组杆状病毒表达载体；（2）表达重组FAdV‑4蛋白的杆状病毒包装和传代；（3）将携带有FAdV‑4‑F2基因的杆状病毒基因组转染进sf9细胞，27℃培养箱中培养5‑7天，观察细胞病变情况；当细胞病变达到70%时收集细胞裂解液，离心去沉淀，作为种毒保存；进行病毒的传代，传至第3代时，作为种毒扩大培养。本发明利用杆状病毒表达系统构建了含F2基因的重组杆状病毒穿梭载体，将其转染Sf9细胞后获得重组杆状病毒rBA‑F2，通过间接免疫荧光试验(IFA)和Western blot鉴定重组蛋白F2的表达。
一种表达血清型禽腺病毒蛋白 f2 重组杆状病毒构建方法

[发明专利]基于杆状病毒表达系统制备包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体的方法-CN201710109641.4有效
发明人：贡成良;曹广力;胡小龙;薛仁宇;刘波;李坤 -专利权人：苏州大学
申请日： 2017-02-27 - 公布日： 2020-06-16 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及抗原蛋白表达技术，具体涉及基于杆状病毒表达系统制备包裹鲤疱疹病毒II型抗原的多角体的方法，通过设计重组家蚕核型多角体病毒BmNPV‑VP3‑cyHV‑polh，ORF72、ORF66、ORF81和ORF82的1‑186、993‑1197、603‑783、85‑186区域序列与家蚕质型多角体病毒结构蛋白VP3基因1‑279区域的编码序列串联融合序列由杆状病毒P10启动子控制；家蚕质型多角体蛋白基因由杆状病毒的多角体蛋白基因启动子控制。用该病毒接种家蚕或家蚕培养细胞，重组病毒表达的鲤疱疹病毒II型的抗原蛋白可包裹进家蚕质型多角体内。形成的多角体可以通过简单的差速离心实现纯化；纯化的多角体在碱性条件下裂解后，可以通过离心使多角体蛋白沉淀，而鲤疱疹病毒II型抗原留存在上清中，从而可以快速、方便地获得鲤疱疹病毒II型抗原。
基于杆状病毒表达系统制备包裹疱疹病毒 ii 抗原多角体方法

[发明专利]一种非洲猪瘟P30蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法-CN201610118546.6有效
发明人：单虎;王玉英;于泽坤;秦志华;张洪亮;黄娟 -专利权人：青岛农业大学
申请日： 2016-03-02 - 公布日： 2020-05-19 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供了一种非洲猪瘟P30蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法，其是从含ASFVP30全长基因的质粒PCR‑4TOPO‑P30中扩增出P30基因，将扩增的P30基因连接至杆状病毒载体pFastBac 1中，构建重组杆状病毒载体pFastBac1‑ASFV‑P30，转化至大肠杆菌感受态细胞DH10Bac中，获得重组穿梭杆粒rBacmid‑ASFV‑P30，鉴定正确后将其转染至Sf 9昆虫细胞，获得重组杆状病毒，并将重组杆状病毒进行传代扩增，将高滴度的含有ASFV P30基因的杆状病毒接到High Five昆虫细胞中进行ASFV P30蛋白的真核表达。选用本发明方法构建非洲猪瘟P30蛋白重组杆状病毒表达载体，并利用重组杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达非洲猪瘟P30蛋白，为非洲猪瘟血清学ELISA检测方法的建立奠定了基础。
一种非洲猪瘟 p30 蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法

[发明专利]利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统高效表达重组蛋白的方法-CN201911359260.7在审
发明人：袁野;岳建新;王飞;孙灵睿;周蕾蕾;陈秋阁;向王震;张秀美;李浩鹏;李浩哲;朱昊敏;魏杰;安铁军 -专利权人：乾元浩生物股份有限公司
申请日： 2019-12-25 - 公布日： 2020-04-17 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供一种利用昆虫细胞‑杆状病毒表达系统高效表达重组蛋白的方法。利用本方法可进行悬浮细胞摇瓶培养及发酵罐生产。对基于Sf9细胞悬浮培养技术的重组蛋白表达效果进行检测，目的蛋白可达到分泌型表达，无需细胞冻融及其复杂的纯化工艺。本工艺简单，易放大，无需换液，仅使用一种培养基便能够达到细胞生长繁殖及蛋白表达的目的。
利用昆虫细胞杆状病毒表达系统高效重组蛋白方法

[发明专利]重组腺相关病毒的制备方法、系统及重组杆粒-CN201811618542.X有效
发明人：吴阳;徐富强;梅婷;蒋良玉;韩增鹏 -专利权人：中国科学院武汉物理与数学研究所
申请日： 2018-12-28 - 公布日： 2020-04-14 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组腺相关病毒(rAAV)的制备方法、系统及重组杆粒。所述方法包括：(1)分别制备穿梭质粒及其相应含有杆状病毒基因组的重组杆粒；(2)将带有异源功能性基因片段的rAAV核心表达元件与其他产生rAAV所必需的功能蛋白组分的表达框整合获得包含生产所述rAAV的重组杆状病毒基因组的重组杆粒；(3)转染到宿主细胞系培养。所述系统包括穿梭质粒及其相应含有杆状病毒基因组的重组杆粒。所述重组杆粒至少包含一种产生rAAV所需的功能蛋白组分的表达框。本发明具备灵活性，兼容性和更高的传代稳定性。
重组相关病毒制备方法系统

[发明专利]一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法及其应用-CN201811151129.7在审
发明人：田克恭;王同燕;孙进忠;张许科 -专利权人：普莱柯生物工程股份有限公司;洛阳惠中生物技术有限公司
申请日： 2018-09-29 - 公布日： 2020-04-07 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供了一种在杆状病毒表达系统中高效表达外源蛋白的方法，该方法通过在pFastbac Dual质粒中p10启动子和多角体启动子之后分别克隆外源蛋白基因，同时在p10启动子和多角体启动子之间插入同源重复序列，使得表达的外源蛋白量大大增加，表达的外源蛋白保持了其原有的免疫原性。本发明的表达外源蛋白的方法高效，低成本，能用于大量制备疫苗。
一种杆状病毒表达系统高效蛋白方法及其应用

[发明专利]可快速测定滴度的杆状病毒表达载体及其构建和应用-CN201610847516.9有效
发明人：吴无畏;刘钰 -专利权人：广西壮族自治区药用植物园
申请日： 2016-09-23 - 公布日： 2020-03-17 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种可快速测定滴度的杆状病毒表达载体，该载体命名为BacG，是在杆状病毒蛋白表达载体Bacmid bMON14272的基因组上非必需基因处插入由杆状病毒极早期启动子ie‑1调控的绿色荧光蛋白基因而获得。该杆状病毒表达载体保留了Bacmid bMON14272完整的蛋白表达能力，同时由该杆状病毒表达载体生产的重组杆状病毒，其滴度可以通过在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达来快速测定，使重组病毒滴度测定的时间缩短至24小时。
快速测定杆状病毒表达载体及其构建应用

[发明专利]一种长效稳定表达的杆状病毒载体及其构建方法-CN201911183740.2在审
发明人：王志昇;杨萌萌;李梦婷;姬勇敢;杨文;陈健茂 -专利权人：宁夏医科大学
申请日： 2019-11-27 - 公布日： 2020-02-04 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组杆状病毒载体及其构建方法，所述重组杆状病毒载体包含SB转座子和编码衰减加速因子(DAF)的基因，所述构建方法包含将SB转座子和编码衰减加速因子(DAF)的基因克隆至杆状病毒载体的步骤。本发明构建的重组杆状病毒表达系统，能够实现外源蛋白的长效、稳定表达。利用本发明构建的重组杆状病毒表达系统在小鼠体内表达hEA(内皮抑素和血管抑素的融合蛋白)，显著提高了荷瘤小鼠的寿命和存活率。本发明的重组杆状病毒表达系统还能有效抵抗血清补体系统的攻击，还能同时借助SB转座系统表达EGFP等荧光蛋白，便于在哺乳动物细胞中持续观察荧光的表现。
构建重组杆状病毒表达重组杆状病毒载体加速因子转座子衰减哺乳动物细胞杆状病毒载体荷瘤小鼠基因克隆内皮抑素融合蛋白体内表达外源蛋白稳定表达血管抑素血清补体荧光蛋白转座系统存活率荧光小鼠抵抗攻击基因观察表现

[发明专利]SmartBac杆状病毒表达系统及其应用-CN201810028508.0有效
发明人：翟宇佳;孙飞 -专利权人：中国科学院生物物理研究所
申请日： 2018-01-12 - 公布日： 2020-01-21 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种SmartBac杆状病毒表达系统及其应用。该系统可包括受体质粒(含片段A或者含片段B和C)和供体质粒(含片段D)；片段A含启动子、蛋白酶编码序列、蛋白酶切割位点、待表达目的物编码基因的插入区和终止序列；片段B含启动子、蛋白酶编码序列和终止序列；片段C含启动子、待表达目的物编码基因的插入区和终止序列；片段D含启动子、待表达目的物编码基因的插入区和终止序列。本发明还提供三种克隆的策略以实现分子量小于600kDa的蛋白质复合物表达、分子量大于600kDa的蛋白质复合物表达及高效筛选最适添加纯化标签的亚基。本发明对于在昆虫细胞中重组表达组分复杂、分子量较大的蛋白质复合物具有重要意义。
smartbac 杆状病毒表达系统及其应用

[发明专利]转导cas9基因到哺乳动物细胞进行基因编辑的方法-CN201911105148.0在审
发明人：马峰;华权高;沈鹤霄;杨洁;陈莹;舒芹 -专利权人：武汉华美生物工程有限公司
申请日： 2019-11-13 - 公布日： 2020-01-14 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供了一种利用昆虫杆状病毒转导cas9基因到哺乳动物细胞进行基因编辑的方法，该方法通过构建含有gRNA、cas9、筛选标记的基因片段、哺乳动物细胞可识别的启动子、转录终止子序列的重组Bacmind质粒，并将其转染sf9细胞，包装获得重组杆状病毒，用其对哺乳动物细胞进行cas9的转导。利用杆状病毒可将大DNA导入哺乳动物细胞，降低cas9/筛选标记基因导入哺乳动物细胞的难度，本发明方法对于cas9的转导效率优异；本发明接近单细胞转导方法，无需反复大量稀释筛选即可找到成功编辑的克隆；所用携带有gRNA/cas9基因的杆状病毒，滴度高，易于保存、复制，可高效重复利用，便于开展相关工作。
哺乳动物细胞转导杆状病毒基因昆虫杆状病毒筛选标记基因重组杆状病毒转录终止子基因片段筛选标记重复利用转导效率可识别启动子大DNA 滴度构建稀释质粒转染克隆复制筛选携带保存成功

[发明专利]重组杆状病毒及其用途-CN201810936407.3在审
发明人：赵裕展;尼那瓦士·古普·奈克;吴宗远;林昌棋;郭赐成 -专利权人：中央研究院;中原大学;林昌棋
申请日： 2018-08-16 - 公布日： 2019-12-10 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明内容关于一种适用于将外源基因引入害虫(特别是传播疾病的蚊子)中的重组杆状病毒。该重组杆状病毒的特征在于具有一启动子(其为一HzNV‑1病毒早期表达基因pag1、一抗菌肽基因b1、一防御素基因a4或hsp70基因的任何一种)；以及一可操作式地与该启动子连结的外源基因。本发明内容也关于一种用以将外源基因引入一害虫的方法。该方法包含将一重组杆状病毒转入该害虫，而不抑制该害虫体内微RNA(miRNAs)的生成，其中该重组杆状病毒包含一pag1、抗菌肽b1、防御素a4或hsp70启动子。
重组杆状病毒害虫启动子外源基因引入病毒早期表达基因防御素基因菌肽基因可操作式外源基因防御素抗菌肽微RNA 一抗蚊子连结体内转入疾病传播