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[发明专利]一种可用于包装大量外源蛋白的重组质粒及构建方法和应用-CN201510777660.5有效
发明人：类承凤;孙修炼;赵丽娟;马瑞鹏;杨士礼 -专利权人：中国科学院武汉病毒研究所
申请日： 2015-11-13 - 公布日： 2021-04-20 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种可用于包装大量外源蛋白的重组质粒及构建方法和应用，基于杆状病毒多角体蛋白的单体结构和多聚体结构的形成机制，将多角体蛋白截断为N端150 aa和C端95 aa，并将C端与绿色荧光蛋白融合，至于两个不同启动子下表达，构建重组型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV），该病毒可以正确形成包涵体，而且包涵体能够在荧光显微镜下发出绿色荧光。此外，将多角体蛋白的C端95 aa与杆状病毒增效蛋白Enhancin或者GP37融合，可以检测到这两个蛋白在AcMNPV包涵体的大量表达，并且其杀虫活性均有显著提高。
一种用于包装大量蛋白重组质粒构建方法应用

[发明专利]能够表达禽法氏囊病病毒样颗粒的重组杆状病毒、病毒样颗粒及其制备方法-CN202011567730.1在审
发明人：郑航辉;方倪冉;陈杏桃;董楠;杨小云 -专利权人：华农（肇庆）生物产业技术研究院有限公司
申请日： 2020-12-25 - 公布日： 2021-04-09 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明属于生物领域，公开了一种能够表达禽法氏囊病病毒样颗粒的重组杆状病毒的制备方法，包括如下步骤：步骤1：扩增鸡传染性法氏囊病病毒IBDV(GT株)的VP2基因后与pFastBac 1载体连接，连接产物转入DH5α感受态中，筛选阳性克隆获得重组质粒pFastBac 1‑VP2，将测序正确的pFastBac 1‑VP2转入DH10 Bac感受态中获得重组质粒Bacmid‑IBDV‑VP2；步骤2：将Bacmid‑IBDV‑VP2转入SF9细胞，收获重组杆状病毒。本发明采用鸡传染性法氏囊病病毒IBDV(GT株)作为VP2基因的来源病毒株，其能表现出更好的免疫效果。同时，本发明还提供一种病毒样颗粒极其制备方法，其优势在于：适于规模化生产、效价高、产物无需浓缩、纯化等工艺，节约成本，流程简单且安全。
能够表达禽法氏囊病病毒颗粒重组杆状病毒及其制备方法

[发明专利]一种基于杆状病毒载体的鲤疱疹病毒II型DNA疫苗及其构建方法与应用-CN201810534457.9有效
发明人：贡成良;曹广力;李坤;刘波;胡小龙;薛仁宇 -专利权人：苏州大学
申请日： 2018-05-29 - 公布日： 2021-03-26 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种基于杆状病毒载体的鲤疱疹病毒II型DNA疫苗及其构建方法与应用。将鲤疱疹病毒II型ORF72、ORF66、ORF81和ORF82的1‑186、993‑1197、603‑783、85‑186 nt区域序列的密码子经优化后，化学合成ORF72‑ORF66‑ORF81‑ORF82融合序列，尔后，用启动子控制，克隆进杆状病毒转移载体pFSATBacTMDual构建重组质粒pFSATBacTMDual‑FA‑D4ORF，该质粒转化DH10/Bac感受态细胞后获Bacmid‑FA‑D4ORF，Bacmid‑FA‑D4ORF DNA转染家蚕培养细胞获BmNPV‑FA‑D4ORF，即基于杆状病毒载体的鲤疱疹病毒II型DNA疫苗。该DNA疫苗可以通过注射或口服或浸泡的方法对异育银鲫进行免疫，减少异育银鲫发生鳃出血病。
一种基于杆状病毒载体疱疹病毒 ii dna 疫苗及其构建方法应用

[发明专利]CDC20突变引发卵子成熟障碍的卵子功能恢复制剂及其使用方法-CN202011133956.0在审
发明人：王磊;匡延平;桑庆 -专利权人：复旦大学;珠海复旦创新研究院
申请日： 2020-10-21 - 公布日： 2021-02-12 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明属于基因治疗技术领域，具体为CDC20突变引发卵子成熟障碍的卵子功能恢复制剂及其使用方法。卵子成熟障碍患者临床表现为试管婴儿术中，患者促排后大多无法获得成熟卵子或成熟卵子受精率低，无有效胚胎，因而试管婴儿反复失败。本发明提供的用于恢复由CDC20基因突变引发卵子成熟障碍的卵子功能的制剂，由一定浓度CDC20cRNA或CDC20蛋白质配制而成；给患者的卵子注射上述制剂使卵子完成成熟过程或显著提高受精率，并可获得有效胚胎及最终建立妊娠。
cdc20 突变引发卵子成熟障碍功能恢复制剂及其使用方法

[发明专利]新冠重组RBD蛋白在昆虫细胞中的生产方法-CN202011216438.5在审
发明人：雍金贵;李森;王方平;邹刚刚 -专利权人：安徽环球基因科技有限公司
申请日： 2020-11-04 - 公布日： 2021-02-12 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了新冠重组RBD蛋白在昆虫细胞中的生产方法，具体包括如下步骤：载体构建，DH10Bac感受态细胞制备，转座以及杆粒的抽提与验证。该新冠重组RBD蛋白在昆虫细胞中的生产方法，通过构建RBD重组质粒时，未加任何标签，因此后期蛋白表达时不会有任何氨基酸残留，从而减少了其他氨基酸残基对后期该蛋白的研究造成的干扰，使用昆虫HF细胞代替昆虫SF9细胞，可以在一定程度上增加了该蛋白的分泌表达质量，在最终放大过程中，48h后立即收集细胞上清进行纯化，缩短了收样时间，纯化时在上清中添加蛋白酶抑制剂且全程低温操作，大大减少了该蛋白的降解可能性，使用Biacore检测目的蛋白活性，确保了目的蛋白活性。
重组 rbd 蛋白昆虫细胞中的生产方法

[发明专利]含猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及制备方法和应用-CN201910354221.1有效
发明人：钱平;李祥敏;李江龙;陈焕春 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2019-04-29 - 公布日： 2020-12-15 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gB蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以GP67信号肽‑gB‑His标签或GP67信号肽‑gB‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和XbaI与HindIII之间酶切位点处；所述gB为编码C端跨膜区片段缺失的gB蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gB蛋白和gB‑IgGFc融合蛋白制备单亚基疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。
含猪伪狂犬病病毒 gb 蛋白基因重组杆状病毒转移载体制备方法应用

[发明专利]一种针对高血压的药物靶点表达和纯化方法-CN202010911659.8在审
发明人：张进;李健;万双燕 -专利权人：深圳晶蛋生物医药科技有限公司
申请日： 2020-09-02 - 公布日： 2020-11-20 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种针对高血压的药物靶点表达和纯化方法。本发明提供了一种针对高血压的药物靶点表达和纯化方法，包括如下步骤：将人全长TRPM4基因片段克隆到pAntigen Mem载体，筛选阳性克隆；提取质粒，转化感受态DH10菌株，挑选阳性克隆；抽提杆粒，在杆状病毒表达系统中产生P3杆状病毒；将P3杆状病毒转导入HEK293S GnTI‑细胞，诱导表达，收集纯化药物靶点。之后，根据针对高血压的TRPM4药物靶点，有利于相应的特异性小分子抑制剂和相关抗体的设计，以用于高血压等心血管疾病的治疗。本申请所述的针对高血压的药物靶点表达和纯化方法能生产具有正常生理活性，产量达毫克级别的针对高血压的药物靶点，促进相应的相关抗体研发。
一种针对高血压药物表达纯化方法

[发明专利]含猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及制备方法和应用-CN201910354213.7有效
发明人：钱平;李祥敏;李江龙;陈焕春 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2019-04-29 - 公布日： 2020-11-17 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供了含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体、重组杆状病毒及其制备方法和应用，属于兽用疫苗技术领域。含有猪伪狂犬病病毒gD蛋白基因的重组杆状病毒转移载体，以HBM信号肽‑gD‑His标签或HBM信号肽‑gD‑IgGFc‑His标签为外源基因分别插入杆状病毒转移载体的BamHI与EcoRI之间的酶切位点处和SpeI和HindIII之间酶切位点处；所述gD为编码跨膜区片段缺失的gD蛋白的基因。所述载体促进猪伪狂犬病病毒gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白的分泌表达。采用gD蛋白和gD‑IgGFc融合蛋白制备亚单位疫苗，具有安全性好、特异性强、攻毒保护率高的特点。
含猪伪狂犬病病毒 gd 蛋白基因重组杆状病毒转移载体制备方法应用

[发明专利]重组表达载体及其构建方法和应用-CN201710371937.3有效
发明人：马美湖;张茂杰;耿放;李述刚;黄群;靳国峰 -专利权人：华中农业大学
申请日： 2017-05-24 - 公布日： 2020-11-06 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种优化的动物蛋白基因OCX‑36及其原核表达载体的构建方法和应用，采取的技术方案是对OCX‑36基因稀有密码子进行改造优化，并切除了信号肽，将优化的OCX‑36基因与载体连接，构建重组质粒pMD‑19T‑OCX‑36，转入到大肠杆菌C41(DE3)感受态细胞中，筛选阳性克隆进行培养、蛋白表达，菌体细胞超声破碎、离心、收集上清液经一次镍柱亲和层析即可获得蛋白rOCX‑36。本发明通过对OCX‑36基因序列的优化，实现了蛋白rOCX‑36的可溶性表达，解决了其难于原核表达的技术问题，表达蛋白对患有结肠炎的小鼠具有明显改善病情的效果，显示rOCX‑36可用于制备治疗结肠炎的药物。
重组表达载体及其构建方法应用

[发明专利]重组杆状病毒表达的鳜鱼弹状病毒糖蛋白的制备方法-CN202010638286.1在审
发明人：刘晓丹;孙威;张晓君;曹攀;张彦冰 -专利权人：扬州大学
申请日： 2020-07-06 - 公布日： 2020-10-30 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组杆状病毒表达的鳜鱼弹状病毒糖蛋白的制备方法，包括：引物设计与合成：目的基因的扩增与纯化；重组供体质粒pFastBac‑G的构建；重组穿梭质粒rBacmid‑G的构建；重组杆状病毒的制备；目的蛋白的纯化及Western blot检测。本发明可以获得大量抗原性、免疫原性较好的、与天然蛋白功能相似的可溶性重组蛋白，适用于鳜鱼弹状病毒糖蛋白的高效表达及DNA疫苗制备。
重组杆状病毒表达鳜鱼弹状病毒糖蛋白制备方法

[发明专利]杆状病毒表达系统及其构建方法和应用-CN202010716613.0在审
发明人：施金秀;罗燕;林映君;蒙伟能;叶知晟;蓝田 -专利权人：云舟生物科技（广州）有限公司
申请日： 2020-07-23 - 公布日： 2020-10-23 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种杆状病毒表达系统及其构建方法和应用，包括杆状病毒穿梭载体、辅助载体和供体载体；所述杆状病毒穿梭载体上含有Tn7靶位点和毒素蛋白基因表达盒；所述辅助载体上含有抗毒素蛋白基因表达盒，所述抗毒素蛋白能够与所述毒素蛋白结合从而中和所述毒素蛋白的毒性，所述辅助载体和所述供体载体的复制子均为温敏型复制子，所述供体载体包含转座子Tn7的左右侧翼序列。利用本发明的杆状病毒表达系统，可快速直接地提取得到一种能够直接用于下游杆状病毒包装的高纯度无污染的重组阳性杆状病毒载体。
杆状病毒表达系统及其构建方法应用

[发明专利]嵌合南非2型口蹄疫病毒多表位基因猪细小病H毒样颗粒的制备方法及应用-CN202010651532.7在审
发明人：张杰;丁耀忠;马维民;李茜;代军飞;汪洋;李国秀;侯谦;马炳;李苗苗;刘永生;张永光 -专利权人：中国农业科学院兰州兽医研究所
申请日： 2020-07-08 - 公布日： 2020-10-20 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明根据计算机软件模拟结果，在猪细小病毒PPV VP2蛋白Loop2区和Loop4区后嵌入SAT2FMDV B细胞表位(VYTKAAAAIRGDRAALAAKYAD TNHTLPPTFNFGYVTVDK)，N端嵌入两个T细胞表位(NVQEGRRKHTDVAFLLDRST)串联。根据昆虫细胞嗜性优化合成嵌合基因GS1927OP，克隆到载体pFastBacTMDual上，转化感受态细胞DH10Bac，获得重组杆粒rBacmidN(T1)2L2B4B，转染sf9细胞收获重组杆状病毒rBacN(T1)2L2B4B，用其感染HF细胞，使用间接免疫荧光IFA针对嵌合表位和VP2蛋白进行检测，具有特异性荧光。Western‑blot针对B、T细胞表位和VP2蛋白进行检测，在72KDa出现一条特异性条带。透射电镜TEM观察，重组蛋白N(T1)2L2B4B能够自我组装成病毒样颗粒。本发明旨在为南非2型口蹄疫制备储备疫苗，并能在此基础上达到同时预防南非2型口蹄疫和猪细小病的目的。
嵌合南非口蹄疫病毒多表位基因细小颗粒制备方法应用

[发明专利]一种广宿主表达载体、基于该载体制备的重组BacMam病毒及其应用-CN202010467041.7在审
发明人：高明春;郭永丽;杜继文;王君伟 -专利权人：东北农业大学
申请日： 2020-05-28 - 公布日： 2020-10-09 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种广宿主表达载体、基于该载体制备的重组BacMam病毒及其应用。所述的广宿主表达载体是以pACEMam1杆状病毒转移载体为基础骨架，对其启动子、融合标签与多克隆位点进行改造，使其可以在大肠杆菌、哺乳动物细胞以及昆虫细胞中均能表达目的蛋白。此外，本发明还提供了携带红色荧光蛋白(mcherry)基因的广宿主表达载体，便于鉴定该载体系统是否正常工作并可选择其作为报告基因来表达具有荧光特性的外源基因。基于该广宿主表达载体，本发明构建了表达BVDV2‑E2的重组BacMam病毒，该重组BacMam病毒在哺乳细胞表达的同时也能在昆虫细胞以及禽类细胞进行表达，且免疫小鼠后，产生的抗体具有中和BVDV2的活性，且具有淋巴细胞增殖活性，可作为BVDV的候选疫苗。
一种宿主表达载体基于制备重组 bacmam 病毒及其应用

[发明专利]一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法及其应用-CN201710412513.7有效
发明人：周小愿;张星朗;韩亚慧;贾秋红;高宏伟 -专利权人：陕西省水产研究所
申请日： 2017-05-28 - 公布日： 2020-10-09 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种大鲵虹彩病毒MCP抗原的制备方法及其应用。本发明在大鲵虹彩病毒MCP蛋白天然表达基因基础上，依据杆状病毒表达系统对密码子的偏爱性进行了基因修饰，并通过优化表达条件显著提升了重组表达基因在杆状病毒表达系统中的表达效率。在此基础上，本发明应用免疫磁珠法对表达的目的蛋白进行纯化，该纯化方法具有很高的纯度和收率。本发明还公开了一种检测大鲵虹彩病毒抗体的ELISA检测试剂盒。
一种大鲵虹彩病毒 mcp 抗原制备方法及其应用

[发明专利]一种既能减少内部病毒粒子又能包埋外源蛋白的多角体的生产方法-CN201711451607.1有效
发明人：于少芳;卢红伶;胡文君;陈琳;裘晓云;沈国新 -专利权人：浙江省农业科学院
申请日： 2017-12-27 - 公布日： 2020-09-29 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种既能减少内部病毒粒子又能包埋外源蛋白的多角体的生产方法，包括以下步骤：(1)构建含有多角体基因的pFast‑PH质粒；(2)构建含有egfp与ac12基因的重组pFast‑PH‑pPH‑ac12‑egfp质粒；(3)构建ac12基因过量表达bacmid‑bAcac12OE；(4)转染细胞，获得重组病毒：(5)将上述重组病毒感染细胞，纯化多角体。本发明在多角体基因之后插入重组外源基因片段，既不影响多角体的形成，又能使外源蛋白包埋入多角体；通过杆状病毒高效强力启动子多角体启动子与AC12蛋白融合表达的方法，实现重组蛋白的高水平表达，降低了多角体内部包涵病毒粒子的水平；为进一步开发利用杆状病毒‑昆虫表达系统，为多角体开发成为新型医疗载体和纳米材料创造了条件。
一种减少内部病毒粒子包埋蛋白多角体生产方法