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[发明专利]稳定的瞬时基因表达-CN97180186.X无效
发明人： R·A·高夫;A·S·高夫 -专利权人：基因观测公司
申请日： 1997-10-31 - 公布日： 1999-12-15 - 主分类号： C12N15/87 文献下载
摘要：本发明提供了用于提高真核细胞中的瞬时表达的方法和试剂。还提供了在实体瘤中用于延长瞬时表达的模型系统，不需饲养细胞或与基层结合的胞外基质即可用于培养肝细胞的方法以及控制细胞代谢以减少细胞的葡萄糖消耗的方法。
稳定瞬时基因表达

[发明专利]构建稳定表达细胞池并进行蛋白表达生产的方法-CN201410851364.0在审
发明人：乔君华;张朗;董烨平;李鹃;蔡洁行 -专利权人：上海药明康德新药开发有限公司
申请日： 2014-12-26 - 公布日： 2016-07-20 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种构建稳定表达细胞池并进行蛋白表达生产的方法，包括步骤：在宿主细胞中筛选一株稳定表达报告基因的母细胞株，然后，运用特异重组酶介导的靶向插入技术在母细胞株中进行外源表达基因和报告基因的置换，以此来构建稳定表达细胞池并进行外源蛋白表达和生产。本发明的方法具有操作简单、构建的表达细胞池稳定且能进行高效表达外源蛋白等优点。
构建稳定表达细胞进行蛋白生产方法

[发明专利]一种快速构建高表达稳定性细胞株的方法-CN201310743883.0有效
发明人：陈倩怡;王笑非 -专利权人：佛山安普泽生物医药有限公司
申请日： 2013-12-30 - 公布日： 2014-04-02 - 主分类号： C12N5/10 文献下载
摘要：本发明提供了一种快速构建高表达稳定性细胞株的方法，步骤如下：（1）构建Gal4-VP16融合蛋白的表达载体质粒；（2）构建UAS-目标基因蛋白的表达载体质粒；（3）将上述Gal4-VP16融合蛋白的表达载体质粒和UAS-目标基因蛋白的表达载体质粒转导进入宿主细胞；（4）选择筛选目标基因的稳定表达细胞株；（5）扩增；（6）获得高表达稳定细胞株。本发明的方法能够有效快速构建高表达的、稳定的细胞株。
一种快速构建表达稳定性细胞株方法

[发明专利]用于形成高生产性细胞的表达载体和所述高生产性细胞-CN201080024765.9有效
发明人：山崎友实;增田兼治;西井重明;川上文清 -专利权人：东洋纺织株式会社
申请日： 2010-06-04 - 公布日： 2012-05-16 - 主分类号： C12N15/09 文献下载
摘要：本发明提供表达载体，其有效用于有效率地形成能够高水平表达目标蛋白基因的转化细胞。特别提供一种表达载体，其包含：含有mRNA去稳定序列的药物选择标记基因的表达盒；至少一个稳定基因表达的元件；和目标蛋白基因的表达盒。优选地，所述mRNA去稳定序列来源自存在于细胞因子、白细胞介素或原癌基因的3’-非翻译区中的富含AT的序列，稳定基因表达的元件来源自中国仓鼠基因组。
用于形成生产性细胞表达载体

[发明专利]在白喉杆菌中稳定复制的表达载体及含该载体的白喉杆菌-CN201210259907.0无效
发明人：朱涛;段磊;宇学锋;邵忠琦;毛慧华;邱东旭 -专利权人：天津康希诺生物技术有限公司
申请日： 2012-07-25 - 公布日： 2012-11-07 - 主分类号： C12N15/77 文献下载
摘要：本发明公开了一种在白喉杆菌中稳定复制的表达载体及含该载体的白喉杆菌，所述载体包括：在白喉杆菌中稳定复制的复制起点DNA序列，能表达导肽蛋白序列的DNA序列和CRM197重组蛋白编码基因的DNA序列。白喉杆菌携带的在白喉杆菌中稳定复制的表达载体，因其具有在白喉杆菌中稳定复制的复制起点DNA序列，因而可以使得表达载体在白喉杆菌中稳定复制，同时表达载体上的能表达导肽蛋白序列的DNA序列可以使得表达的CRM197重组蛋白进行分泌表达并分泌到胞外，从而使得CRM197重组蛋白的表达量得到提高，使得表达的CRM197重组蛋白的纯化工艺进一步简化，提高了蛋白得率，节约了生产时间和成本。
白喉杆菌稳定复制表达载体

[发明专利]一种Aurora B稳定表达细胞系及其在抗癌小分子药物筛选中的应用-CN200810119703.0无效
发明人：张传茂;傅静雁;辛广伟;蒋青 -专利权人：北京大学
申请日： 2008-09-05 - 公布日： 2009-01-14 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种Aurora B稳定表达细胞系及其在药物筛选中的应用。本发明所提供的Aurora B稳定表达细胞系的制备方法，包括以下步骤：1)将Aurora B的编码基因插入真核表达载体的多克隆位点，得到重组表达载体；2)将步骤1得到的重组表达载体导入宿主细胞中，筛选得到稳定表达本发明的Aurora B稳定表达细胞系为深入探索Aurora B在癌症发生中的作用提供实验技术平台，可用于筛选抗癌的小分子药物。
一种 aurora 稳定表达细胞系及其抗癌分子药物筛选中的应用

[发明专利]一种基于双阻遏策略增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法-CN201310505664.9有效
发明人：聂尧;徐岩 -专利权人：江南大学
申请日： 2013-10-24 - 公布日： 2014-02-05 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：一种基于双阻遏策略增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法，属于大肠杆菌表达调控领域。本发明利用基因工程技术，以细菌来源的普鲁兰酶为表达蛋白，构建了表达普鲁兰酶的重组大肠杆菌。通过使用含有lac操纵子和阻遏物基因lacI的pET表达载体pET-22b(+)和pET-28a(+)，构建了重组菌E.coliBL21/pET-22b(+)-pul和E.coliBL21/pET-28a(+)-PelB-pul，利用lac操纵子严谨的双阻遏调控策略，基本消除了毒性外源蛋白的本底表达，提高了冷冻甘油菌种的表达稳定性和乳糖自诱导后的目标蛋白表达量，增强了大肠杆菌表达系统稳定性。本发明解决了大肠杆菌T7表达系统中常见的系统稳定性问题，开发了增强大肠杆菌T7表达系统稳定性的方法。
一种基于阻遏策略增强大肠杆菌 t7 表达系统稳定性方法

[发明专利]构建稳定高效表达c-met蛋白的大鼠骨髓间充质干细胞细胞株的方法-CN201610662140.4有效
发明人：朱传龙;王坤;李毓雯;李军;岳明;朱甜甜 -专利权人：江苏省人民医院（南京医科大学第一附属医院）
申请日： 2016-08-12 - 公布日： 2019-09-13 - 主分类号： C12N15/867 文献下载
摘要：本发明公开一种稳定高效表达c‑met蛋白的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞株的构建方法，通过构建c‑met基因慢病毒表达载体，并转染到BMSCs，以获得稳定、高效表达c‑met蛋白的BMSCs细胞株；本发明获得的BMSCs细胞株可以稳定分泌表达c‑met蛋白，蛋白表达量较高，且可稳定传代等，对于肝衰竭、肿瘤等疾病的研究具有重要意义。
细胞株高效表达构建大鼠骨髓间充质干细胞慢病毒表达载体传代蛋白表达量分泌表达重要意义肝衰竭转染肿瘤基因疾病研究

[发明专利]一种提高哺乳动物细胞附着体载体转基因表达水平的方法-CN202211271340.9在审
发明人：王小引;王天云;张玺;王耀坤;李树军;王浩民;朱嘉懿;姬梦莹;杨献军 -专利权人：新乡医学院;河南普诺易生物制品研究院有限公司
申请日： 2022-10-18 - 公布日： 2023-05-05 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明属于基因工程技术领域，本发明提供了一种提高哺乳动物细胞附着体载体转基因表达水平的方法。本发明方法利用优化后的SAF‑A基因构建辅助基因重组表达载体，先转染宿主细胞，经筛选得到稳定细胞株后，再转染外源基因表达载体，经稳定筛选，宿主细胞可稳定表达目的蛋白。通过实验验证，使用本发明的方法，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。
一种提高哺乳动物细胞附着载体转基因表达水平方法

[发明专利]多巴胺2型受体稳定表达细胞株-CN202110156314.0有效
发明人：刘剑峰;范治然;李豫华 -专利权人：生物岛实验室;华中科技大学
申请日： 2021-02-04 - 公布日： 2023-02-03 - 主分类号： C12N15/864 文献下载
摘要：本发明涉及表达多巴胺2型受体的重组表达载体、表达系统，以及具有该重组表达载体或表达系统的细胞。本发明提供的多巴胺2型受体稳定表达细胞株利用基因编辑法将目的基因稳定敲入到细胞基因组中，可很稳定地随着细胞复制而复制，不会出现在细胞株传代而丢失的情况，可以用于以多巴胺2型受体为靶点的药物开发和功能检测
多巴胺受体稳定表达细胞株

[发明专利]一种RXRα蛋白稳定高表达细胞系及其制备方法-CN201810692098.X在审
发明人：张建清;李云秀;蒋友胜;吴东亭;彭金铃 -专利权人：深圳市疾病预防控制中心（深圳市卫生检验中心、深圳市预防医学研究所）
申请日： 2018-06-28 - 公布日： 2018-11-13 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于生物制备技术领域，特别涉及一种RXRα蛋白稳定高表达的RXRα基因稳定转染细胞系及其制备方法。所述细胞系为RXRα基因随机整合至SK‑N‑SH细胞染色体的细胞克隆，细胞系基因型稳定，可随细胞增殖稳定遗传，子代细胞内稳定高表达RXRα蛋白，大大提升了RXRα蛋白高表达的稳定性，以保证RXRα基因功能性和受试材料的可靠性本发明提供了一种所述细胞系的制备方法，设计制备真核表达载体，经细胞核转染技术以真核表达载体转染SK‑N‑SH细胞，经G418药物筛选得到RXRα基因稳定转染成功的细胞克隆，PCR、基因测序鉴定其是否为RXRα基因稳定转染阳性的细胞克隆，采用Westernblot技术鉴定阳性克隆细胞内RXRα蛋白表达水平，从而得到基因型可稳定传代的RXRα蛋白稳定高表达细胞系。
高表达制备蛋白稳定细胞克隆转染真核表达载体基因型蛋白蛋白表达水平阳性克隆细胞细胞核传代细胞染色体转染细胞系基因测序技术鉴定生物制备稳定遗传细胞增殖药物筛选转染技术子代细胞整合细胞保证成功

[发明专利]一种谷氨酰激酶的表达调控序列及其应用-CN202211027795.6有效
发明人：郑平;刘娇;孙际宾;周文娟;刘建行;孙冠男;乔倩倩 -专利权人：中国科学院天津工业生物技术研究所
申请日： 2022-08-25 - 公布日： 2023-09-05 - 主分类号： C12N15/31 文献下载
摘要：本发明提供的具有表达调控活性的多核苷酸，核苷酸序列如序列SEQ ID NO：3‑5任一项所示，是表达调控活性显著提高的谷氨酸棒杆菌来源的表达调控元件的突变体。与野生型表达调控元件相比，突变体的表达调控活性显著提高，将其与目标基因可操作地连接，可以显著提高目标基因的表达强度，且不会破坏基因组的稳定性，使目标基因能够稳定高效表达，进而稳定、高效的生产下游产物。
一种谷氨酰激酶表达调控序列及其应用

[发明专利]一种HER2稳定表达细胞系及其在药物筛选中的应用-CN200810119702.6无效
发明人：张传茂;张宏印;蓝荣峰 -专利权人：北京大学
申请日： 2008-09-05 - 公布日： 2009-01-14 - 主分类号： C12N15/12 文献下载
摘要：本发明公开了一种HER2稳定表达细胞系及其在药物筛选中的应用。本发明所提供的HER2稳定表达细胞系的制备方法，包括以下步骤：1)将HER2的编码基因插入真核表达载体的多克隆位点，得到重组表达载体；2)将步骤1得到的重组表达载体导入宿主细胞中，筛选得到稳定表达HER2本发明的HER2稳定表达细胞系为深入探索HER2在乳腺癌发生中的作用提供实验技术平台，可用于筛选预防和/或治疗乳腺癌的药物。
一种 her2 稳定表达细胞系及其药物筛选中的应用

[发明专利]携带双筛选基因的真核表达载体构建及其应用-CN201110283158.0无效
发明人：董小岩;田文洪;吴小兵;董哲岳 -专利权人：北京五加和分子医学研究所有限公司
申请日： 2011-09-22 - 公布日： 2013-04-03 - 主分类号： C12N15/79 文献下载
摘要：本发明具体涉及一种携带dhfr和neo基因的真核表达载体pAAV2neo-dhfr，该表达载体主要由AAV2的ITR、neo基因表达框、dhfr基因表达框和外源基因表达框组成，其中外源基因表达框中含有多克隆位点MCS，用于表达外源基因的插入。使用时将外源基因插入其表达框的多克隆位点之间，获得外源基因的表达载体，转染表达细胞，多种策略筛选获得外源基因的稳定高表达细胞株。由于该载体携带AAV2的ITR序列，因此有利于外源基因稳定表达细胞株的获得。同时，该载体包含两种筛选基因，适用于多种表达细胞并缩短稳定高表达细胞株的筛选过程。本载体可高效地真核表达多种外源基因，为真核蛋白的表达提供了新的选择。
携带筛选基因表达载体构建及其应用

[发明专利]哺乳动物细胞表达系统-CN201310232138.X有效
发明人：侯永敏;李强;廖莎;雷瑶 -专利权人：广州优联康医药科技有限公司
申请日： 2013-06-13 - 公布日： 2013-10-02 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明涉及一种高效稳定的哺乳动物细胞表达系统，该表达系统应用新型的高效表达载体，将目标基因在合适的哺乳动物宿主细胞株中进行高效表达。利用本发明的表达系统可以显著提高目标基因在宿主细胞中的表达水平，同时大大减少筛选高表达细胞株的时间和成本，实现目标蛋白在哺乳动物细胞中的高产量稳定表达。
哺乳动物细胞表达系统

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