本发明提供了一种重组表达载体、制备得到的III型鸭甲型肝炎病毒样颗粒、制备方法及应用，包含III型鸭甲型肝炎病毒结构蛋白前体基因P1和蛋白水解酶基因3C；所述结构蛋白前体基因P1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述蛋白水解酶基因3C的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。经过密码子优化的基因在昆虫细胞中表达水平明显提高，可获得具有较好空间构型的蛋白，在胞内自发组装成病毒样颗粒(VLPs)，够获得高纯度、形态均一、性状稳定的病毒颗粒。
本发明公开了一种昆虫细胞表达载体、表达系统及其应用，所述昆虫细胞表达载体中含有增强子、信号肽和3’UTR非编码区；其中，增强子位于启动子前且序列如SEQ ID NO.1所示，信号肽位于启动子和多克隆位点之间且其碱基序列如SEQ ID NO.2所示，3’UTR非编码区位于终止密码子和poly(A)signal之间且序列如SEQ ID NO.3所示。本发明通过增强子、信号肽和3’UTR非编码序列联用的改造杆状病毒表达载体，进而有效改善昆虫细胞表达系统分泌外源蛋白的能力，获得可溶性、高纯度和高产量的重组蛋白；本发明提供的表达载体和表达系统广泛适用于制备真核生物的所有蛋白在昆虫杆细胞中高效分泌表达。
一种提高家蚕细胞表达外源蛋白分泌率的方法，提取家蚕BmN细胞的全部RNA反转录得到的cDNA，以反转录得到的cDNA为模板合成spz基因，再将SEQ ID NO.1所示的spz基因转入家蚕BmN细胞中，可以提高家蚕细胞表达外源蛋白的分泌率。本发明能有效提高家蚕细胞内表达外源蛋白的分泌效率，为提高家蚕细胞内表达外源蛋白的分泌率提供新的研究方向和思路，为信号肽参与蛋白分泌的机制研究提供参考。
