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[发明专利]重组人成纤维细胞生长因子-18的生产方法及其用途-CN201510697155.X在审
发明人：马吉胜;姜潮;田海山;刘敏;黄金枝 -专利权人：温州医科大学;李校堃
申请日： 2015-10-23 - 公布日： 2015-12-30 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明一种重组人成纤维细胞生长因子-18蛋白的生产方法，包括以下步骤：步骤一、利用昆虫杆状病毒载体表达系统在昆虫细胞中表达成纤维细胞生长因子-18蛋白，具体包括：1)获得重组杆状病毒Bacmid-FGF18，FGF18基因为成纤维细胞生长因子-18基因，碱基序列如SEQ ID NO:1所示，2)用步骤1)得到的MOI为1～32的Bacmid-FGF18重组杆状病毒侵染昆虫细胞，之后于温度25～29℃下培养12h～96h后收获细胞液；以及，步骤二、从步骤一收获的细胞液中纯化得到人成纤维细胞生长因子-18蛋白。本发明还公开了重组人成纤维细胞生长因子-18蛋白用于治疗骨骼性疾病和脱发症的用途。
重组纤维细胞生长因子 18 生产方法及其用途

[发明专利]一种昆虫细胞表达抗菌肽Cecropin DC1的方法-CN201510616121.3有效
发明人：黄自然;陈松彬;倪彦燕 -专利权人：广州市科玮生物技术有限公司
申请日： 2015-09-24 - 公布日： 2015-12-30 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种昆虫细胞表达抗菌肽Cecropin DC1的方法。本发明根据天然抗菌肽的序列，利用基因工程，设计合成抗菌肽CecropinDC1的基因，构建含有抗菌肽Cecropin DC1基因的重组病毒，并利用Sf21细胞作为宿主，表达生产具有生物活性的重组抗菌肽Cecropin DC1。
一种昆虫细胞表达抗菌 cecropin dc1 方法

[发明专利]重组表达载体及其构建方法、重组病毒毒株及其应用、重组蛋白及亚单位疫苗-CN201510257530.9在审
发明人：李秋菊 -专利权人：吉林和元生物工程有限公司
申请日： 2015-05-20 - 公布日： 2015-11-11 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及动物病毒学和基因工程学技术领域，特别涉及重组表达载体及其构建方法、重组病毒毒株及其应用、重组蛋白及亚单位疫苗。本发明成功PCR扩增PRRSV-GP5基因和PCV2-Cap基因及构建高效重组表达质粒BacSC-Dual-GP5-Cap。此外，本发明重组毒株所表达的重组蛋白，其产物表达产量很高。用研制的BacSC-Dual-GP5-Cap亚单位疫苗制品对本动物是安全的。疫苗免疫效力试验结果表明，利用基因工程方法研制的PRRSV和PCV2具有良好的免疫原性，该亚单位疫苗在猪蓝耳病和猪圆环病的防制方面将具有很广泛的应用前景。
重组表达载体及其构建方法病毒应用蛋白单位疫苗

[发明专利]在昆虫细胞sf9中表达hABCG2的方法-CN201310751320.6在审
发明人：谢伟胜;张科之 -专利权人：苏州杰诺曼博生物科技有限公司
申请日： 2013-12-31 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种在昆虫细胞sf9中表达人hABCG2的方法，是将两端分别包含BamHI和HindIII酶切位点的人ABCG2基因克隆入pFastBac1载体的BamHI和HindIII位点，将得到的重组质粒pFastBac1-hABCG2转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞，获得插入hABCG2基因的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-hABCG2，脂质体介导上述重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-hABCG2转染sf9昆虫细胞，获得表达hABCG2的重组病毒，进一步培养所述重组病毒，表达hABCG2蛋白。本发明方法为hABCG2蛋白的大量获得提供一条新途径，为hABCG2蛋白的应用开发打下工作基础。
昆虫细胞 sf9 表达 habcg2 方法

[发明专利]在昆虫细胞sf9中表达hABCB11的方法-CN201310749567.4在审
发明人：谢伟胜;张科之 -专利权人：苏州杰诺曼博生物科技有限公司
申请日： 2013-12-31 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种在昆虫细胞sf9中表达人hABCB11的方法，是将两端分别包含BamHI和HindIII酶切位点的人ABCB11基因克隆入pFastBac1载体的BamHI和HindIII位点，将得到的重组质粒pFastBac1-hABCB11转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞，获得插入hABCB11基因的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-hABCB11，脂质体介导上述重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-hABCB11转染sf9昆虫细胞，获得表达hABCB11的重组病毒，进一步培养所述重组病毒，表达hABCB11蛋白。本发明方法为hABCB11蛋白的大量获得提供一条新途径，为hABCB11蛋白的应用开发打下工作基础。
昆虫细胞 sf9 表达 habcb11 方法

[发明专利]一种在昆虫细胞sf9中表达hABCC2的方法-CN201310752196.5在审
发明人：谢伟胜;张科之 -专利权人：苏州杰诺曼博生物科技有限公司
申请日： 2013-12-31 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种在昆虫细胞sf9中表达人hABCC2的方法，是将两端分别包含BamHI和HindIII酶切位点的人ABCC2基因克隆入pFastBac1载体的BamHI和HindIII位点，将得到的重组质粒pFastBac1-hABCC2转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞，获得插入hABCC2基因的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-hABCC2，脂质体介导上述重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-hABCC2转染sf9昆虫细胞，获得表达hABCC2的重组病毒，进一步培养所述重组病毒，表达hABCC2蛋白。本发明方法为hABCC2蛋白的大量获得提供一条新途径，为hABCC2蛋白的应用开发打下工作基础。
一种昆虫细胞 sf9 表达 habcc2 方法

[发明专利]一种在昆虫细胞sf9中表达hABCB1的方法-CN201310749571.0在审
发明人：谢伟胜;张科之 -专利权人：苏州杰诺曼博生物科技有限公司
申请日： 2013-12-31 - 公布日： 2015-07-01 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种在昆虫细胞sf9中表达人hABCB1的方法，是将两端分别包含BamHI和HindIII酶切位点的人ABCB1基因克隆入pFastBac1载体的BamHI和HindIII位点，将得到的重组质粒pFastBac1-hABCB1转化DH10Bac大肠杆菌感受态细胞，获得插入hABCB1基因的重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-hABCB1，脂质体介导上述重组杆状病毒穿梭载体Bacmid-hABCB1转染sf9昆虫细胞，获得表达hABCB1的重组病毒，进一步培养所述重组病毒，表达hABCB1蛋白。本发明方法为hABCB1蛋白的大量获得提供一条新途径，为hABCB1蛋白的应用开发打下工作基础。
一种昆虫细胞 sf9 表达 habcb1 方法

[发明专利]对氧磷酶1基因的表达纯化方法-CN201310701927.3在审
发明人：张耀洲;谭淑敏;李杰;王小飞;盖其静 -专利权人：天津耀宇生物技术有限公司
申请日： 2013-12-19 - 公布日： 2015-06-24 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种对氧磷酶1基因的表达纯化方法，属于基因工程技术领域。本发明的方法是首先扩增对氧磷酶1基因，连接到转移载体pFastBacTMⅠ上构建重组转移载体，转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，获得含有对氧磷酶1基因的重组杆状病毒DNA，将其转染家蚕BmN细胞，复制装配成含对氧磷酶1基因的重组病毒后，接种家蚕五龄幼虫，发病后取蚕血，经离心过滤除杂并经浓缩后用汽巴蓝亲和层析以及抗体亲和层析纯化蚕血，获得对氧磷酶1蛋白。该方法实现了蛋白的高效表达且结构接近天然蛋白，解决了天然PON1含量低、难纯化的问题。
氧磷酶基因表达纯化方法

[发明专利]重组质粒、利用该重组质粒制备的重组杆状病毒以及该病毒在疫苗制备中的应用-CN201310705623.4在审
发明人：张耀洲;盛稳稳;崔立旺;郭庆拓;舒特俊;陈剑清;盖其静 -专利权人：特菲（天津）生物医药科技有限公司
申请日： 2013-12-16 - 公布日： 2015-06-17 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供一种重组质粒、利用该重组质粒制备的重组杆状病毒以及该病毒在间日疟传播阻断疫苗制备中的应用。该重组质粒由一段重组序列插入到pFastBacDual质粒中构建而成，该重组序列为根据CMV、Pph、SP、TM已知序列，在SP和TM序列间加入Xba I酶切位点和Xho I酶切位点，CMV-F前加入KpnI酶切位点，TM-R后加入HindIII酶切位点形成。该重组杆状病毒由Pvs25基因插入到上述重组质粒并通过转座与穿梭载体Bacmid的基因组进行同源重组，然后转染家蚕细胞，在家蚕细胞内包装得到。此生产疫苗的方法具有安全性好、生产成本低、易于大规模生产操作的特点。
重组质粒利用制备杆状病毒以及病毒疫苗中的应用

[发明专利]一种重组杆状病毒及制备方法以及在癌症疫苗制备中的应用-CN201310656615.5在审
发明人：张耀洲;张皓;陈剑清;舒特俊 -专利权人：特菲（天津）生物医药科技有限公司
申请日： 2013-12-05 - 公布日： 2015-06-10 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明提供一种家蚕重组杆状病毒Bm-CMV-DLL4-DAF，它以杆状病毒表达载体Pfastbacdual为载体，包含有CMV-IE启动子、DLL4基因、gp64信号肽基因、DAF蛋白基因以及gp64跨膜区基因。制备步骤包括：PCR扩增CMV-IE启动子序列、DLL4蛋白基、gp64信号肽基因序列、gp64跨膜区基因序列、DAF基因序列，构建Pfastbacdual-CMV-DLL4-DAF重组质粒，提取病毒基因组。该家蚕重组杆状病毒稳定性好，宿主感染率高，表达能力强，能在哺乳动物细胞内高效表达DLL4蛋白，从而激起较强而有效的免疫反应，适用于应用在癌症疫苗制备中。
一种重组杆状病毒制备方法以及癌症疫苗中的应用

[发明专利]一种剔除β2-微球蛋白基因片段的方法-CN201510023650.2有效
发明人：王朔;朱海宝 -专利权人：深圳市科晖瑞生物医药有限公司
申请日： 2015-01-16 - 公布日： 2015-05-13 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开一种剔除β2-微球蛋白基因片段的方法，包括如下步骤:(1)构建CRISPR/Cas9载体系统；(2)利用构建的CRISPR/Cas9载体系统将目的基因导入受体细胞,剔除β2-微球蛋白基因片段；(3)对转染后的受体细胞进行检测和鉴定。本发明公开的方法是一个新的靶向剔除人体细胞基因的遗传工程方法。此方法利用杆状病毒载体作为传递系统，在人体细胞内高效表达剔除B2M基因的特异性CRISPR/Cas9组件，有效阻断B2M基因表达，降低细胞表面第一型HLA分子的表达，从而产生低免疫源性的人体细胞。
一种剔除球蛋白基因片段方法

[发明专利]一种重组人乳铁蛋白蚕蛹粉及其制备方法和应用-CN201310511073.2在审
发明人：张耀洲;赵红玉;舒特俊;盖其静;李亚宾 -专利权人：天津耀宇生物技术有限公司
申请日： 2013-10-23 - 公布日： 2015-04-29 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明涉及一种重组人乳铁蛋白蚕蛹粉及其制备方法和应用，属于生物医药技术领域。本发明主要利用家蚕杆状病毒表达系统构建重组病毒，以家蚕蛹作为生物反应器表达重组人乳铁蛋白，将接种重组病毒发病后的蚕蛹制成冻干粉，通过体外抑菌试验进行活性检测，以灌胃方式治疗由葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠溃疡性结肠炎，对小鼠的疾病活动指数(DAI)进行分析，并检测其结肠组织中髓过氧化物酶(MPO)的含量，结果表明家蚕蛹中成功表达了具有抑菌活性的重组人乳铁蛋白(rhLF)，且rhLF蚕蛹粉对DSS诱导的小鼠溃疡性结肠炎具有一定的治疗作用，为生产新型的口服蛋白药物提供了一种简单、廉价的方法。
一种重组铁蛋白蚕蛹及其制备方法应用

[发明专利]一种表达脊髓灰质炎病毒样颗粒蛋白的载体及脊髓灰质炎病毒样颗粒的制备方法-CN201410730075.5在审
发明人：彭涛;许煜华;马书智;王弋;安鸿;尹海滨 -专利权人：广东华南联合疫苗开发院有限公司
申请日： 2014-12-04 - 公布日： 2015-04-01 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种表达脊髓灰质炎病毒样颗粒蛋白的载体及脊髓灰质炎病毒样颗粒的制备方法，该载体中含有以下结构的表达框：脊髓灰质炎病毒结构蛋白VP0、VP1、VP3三个基因中任一个基因位于启动子1下游；另外两个基因之间通过2A序列连接位于启动子2下游；2个启动子启动表达的方向相反。脊髓灰质炎病毒样颗粒的制备方法为将前文所述的载体转染相应的宿主细胞，培养后可获得病毒样颗粒或者重组杆状病毒，若获得的是重组杆状病毒，再将该病毒感染宿主细胞，即可获得病毒样颗粒。本发明获得的脊髓灰质炎病毒样颗粒可以在体内分别诱导高效价的中和滴度，可作为防治脊髓灰质炎病毒感染相关疾病的疫苗。
一种表达脊髓灰质炎病毒颗粒蛋白载体制备方法

[发明专利]一种人热休克蛋白gp96的制备方法及其应用-CN201410498405.2在审
发明人：孟颂东;赵报;刘炜炜;邓蒙蒙;陈立钊 -专利权人：中国科学院微生物研究所
申请日： 2014-09-25 - 公布日： 2015-02-25 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本发明公开了一种人热休克蛋白gp96的制备方法及其应用。本发明公开一种制备人热休克蛋白gp96的方法，是在昆虫细胞中表达人热休克蛋白gp96。采用本发明公开的昆虫细胞表达系统表达的人热休克蛋白gp96不结合抗原多肽，因此可以更好的与HBcAg和HBsAg结合，从而增强了其免疫学功能，由此昆虫细胞分泌表达的人热休克蛋白gp96作为佐剂研制的乙肝治疗性疫苗，可大幅提高乙肝治疗性疫苗的抗HBV疗效。
一种休克蛋白 gp96 制备方法及其应用

[发明专利]一种生产人源胶原蛋白Ⅱ型的方法-CN201410579575.3有效
发明人：孙京臣;黄亚东;梁智升;齐琦;黄秋生;项琪;贝煜 -专利权人：华南农业大学;广州暨南大学医药生物技术研究开发中心;广东凯利生物科技有限公司
申请日： 2014-10-24 - 公布日： 2015-01-28 - 主分类号： C12N15/866 文献下载
摘要：本文发明公开了一种生产重组人源胶原蛋白Ⅱ型的方法，属于基因工程的技术领域。其特征在于：利用杆状病毒多基因表达系统，用转化了该杆状病毒多基因表达系统的细菌感染昆虫细胞，产生一种表达多基因的杆状病毒，将病毒液侵染昆虫细胞或注射入家蚕幼虫体内，由此生产重组人源胶原蛋白Ⅱ型全长蛋白，其蛋白结构为3条具有(G-X-Y)_n重复序列的肽链形成三股螺旋结构，保持天然胶原蛋白Ⅱ型的构象，具有天然胶原蛋白Ⅱ型的活性。采用本发明的方法，能表达多个基因，利于生产胶原蛋白Ⅱ型全长蛋白；本发明工艺方法简单，操作简便，工艺路线短。
一种生产胶原蛋白方法