[发明专利]用于检测新冠病毒的荧光PCR检测试剂盒及检测方法

说明书

本发明涉及一种用于检测新冠病毒的荧光PCR检测试剂盒及检测方法，其包括新冠内参、特异性引物、内参检测探针、第一检测探针和第二检测探针，新冠内参为所述特异性引物中的一对引物的靶序列，内参荧光报告基团、所述第一荧光报告基团和所述第二荧光报告基团互不相同。本发明的用于检测新冠病毒的荧光PCR检测试剂盒中，新冠内参为特异性引物中的一对引物的靶序列，同时具有不同荧光报告基团的内参检测探针、第一检测探针和第二检测探针具有部分共用的特异性引物，通过分析内参检测探针、第一检测探针和第二检测探针的荧光信号，能够减少假阴性的结果，既能够增加单次检测的靶点数目，提高检测灵敏度，同时也可提高检测的准确性。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，特别是涉及一种用于检测新冠病毒的荧光PCR检测试剂盒及检测方法。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2，亦被称为2019-nCoV)属于β属的冠状病毒，颗粒呈圆形或椭圆形直径60nm～140nm，基因特征与SARS具有明显的区别，且相比于SARS具有更高的感染能力。世界卫生组织于2020年2月11日将新型冠状病毒感染的肺炎命名为“COVID-19”(Corona Virus Disease 2019)，中文译名为“2019冠状病毒病”，其名称解释为：CO代表冠状(Corona)，VI代表病毒(Virus)，D代表疾病(Disease)，19则因为疾病爆发于2019年。与此同时，国际病毒分类委员会声明，将新型冠状病毒命名为“SARS-CoV-2”(Severe AcuteRespiratory Syndrome Coronavirus 2)，并认定这种病毒是SARS冠状病毒的姊妹病毒。对冠状病毒理化特性的认识多来自对SARSr-CoV和MERSr-CoV的研究，病毒对紫外线和热敏感，56℃30分钟、乙醚、75％乙醇、含氯消毒剂、过氧乙酸和氯仿等脂溶剂均可有效灭活病毒，氯己定不能有效灭活病毒。

基于流行病学调查，COVID-19的潜伏期为1～14天，多为3～7天，症状以发热、干咳、乏力为主，重症患者多在发病一周后出现呼吸困难和/或低氧血症，严重者可快速进展为急性呼吸窘迫综合征、脓毒症休克、难以纠正的代谢性酸中毒和出现凝血功能障碍及多器官功能衰竭等。值得注意的是，重症、危重症患者病程中可为中低热，甚至无明显发热。部分患者起病症状轻微，可无发热，多在1周后恢复。多数患者预后良好，少数患者病情危重，甚至死亡。新型冠状病毒主要的传播途径还是呼吸道飞沫传播和接触传播，气溶胶等传播途径尚待进一步明确。通过流行病学调查显示，病例多可以追踪到与确诊的病例有过近距离密切接触的情况。各个年龄段的人都可能被感染，被感染的主要是成年人，其中老年人和体弱多病的人似乎更容易被感染。发病早期外周血白细胞总数正常或减少，淋巴细胞计数减少，部分患者可出现肝酶、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酶和肌红蛋白增高，部分危重者可见肌钙蛋白增高，多数患者C反应蛋白(CRP)和血沉升高，降钙素原正常，严重者D-二聚体升高、外周血淋巴细胞进行性减少，重型、危重型患者常有炎症因子升高。临床分型分为“轻型、普通型、重型和危重型”，将“肺部影像学显示24～48小时内病灶明显进展＞50％者”按重型管理。如何快速确诊疑似病例，以及如何有效监控疾病进程，将为治疗COVID-19的重点。

据《新型冠状病毒肺炎诊疗方案(试行第六版)》中规定，目前确诊COVID-19的方法为使用实时荧光RT-PCR检测新型冠状病毒核酸阳性，或病毒基因测序与已知的新型冠状病毒高度同源。聚合酶链式反应PCR已广泛应用于基础研究和临床实践，尤其是实时荧光PCR技术，在临床上基因定性与定量分析中更是扩展了基因检测的范围。目前临床常用的荧光PCR仪，主要提供4种或5种荧光通道，一般检测利用一个荧光通道作为内参，其余3种或4种荧光通道用于检测待测标本。但是，目前用于新冠病毒的荧光PCR检测试剂盒的灵敏度和准确性仍然较低。

发明内容

基于此，有必要提供一种灵敏度和准确性较高的用于检测新冠病毒的荧光PCR检测试剂盒。

一种用于检测新冠病毒的荧光PCR检测试剂盒，包括新冠内参、特异性引物、内参检测探针、第一检测探针和第二检测探针；